Registro:
Documento: | Tesis Doctoral |
Disciplina: | biologia |
Título: | Identificación y caracterización de proteínas en el Trypanosoma cruzi relacionadas con Glutatión - S - transferasas de otros organismos con el fin de definir blancos potenciales para el control de la transmisión de la infección |
Título alternativo: | Identification and chacterization of Trypanosoma cruzi proteins related to Glutation-S- Transferase of other organisms. Potential targets for the control of infection transmission |
Autor: | García, Gabriela Andrea |
Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
Filiación: | Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben"
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Publicación en la Web: | 2017-03-01 |
Fecha de defensa: | 2001 |
Fecha en portada: | 2001 |
Grado Obtenido: | Doctorado |
Título Obtenido: | Doctor en Ciencias Biológicas |
Director: | Ruiz, Andrés Mariano |
Idioma: | Español |
Tema: | biología/parasitología
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Formato: | PDF |
Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3346_Garcia |
PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n3346_Garcia.pdf |
Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n3346_Garcia |
Ubicación: | Dep.BIO 003346 |
Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. García, Gabriela Andrea. (2001). Identificación y caracterización de proteínas en el Trypanosoma cruzi relacionadas con Glutatión - S - transferasas de otros organismos con el fin de definir blancos potenciales para el control de la transmisión de la infección. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3346_Garcia |
Resumen:
Las drogas utilizadas para el tratamiento de la infección por T.cruzi, agente etiológico de la enfermedad de Chagas, presentanmúltiples efectos colaterales y una eficacia variable en las etapasindeterminada y crónica de la infección. Por otro lado, no existeuna vacuna para esta parasitosis que impida la transmisión y/o laenfermedad. Teniendo en cuenta la necesidad de la obtención de buenosinmunógenos y nuevas drogas tripanocidas más efectivas yseguras, el objetivo del Trabajo de Tesis fue definir nuevosposibles blancos para el control de la transmisión de la infecciónpor T. cruzi a partir de la identificación de proteínas en esteparásito relacionadas con glutatión-S-transferasas (GSTs)de otrosorganismos. la selección de las GSTs para dirigir esta búsqueda sebasó en la participación de esta enzima, cuyos genes aun nofueron identificados en T. cruzi, en un metabolismo divergenteentre el parásito y su hospedero mamífero y en una respuestainmune protectiva contra la infección experimental por esteparásito. En la primera parte del trabajo, que se denominó Parte A, seplanteó la identificación de secuencias de genes funcionalesresultantes del Proyecto Genoma de T. cruzi con homología con GSTs y su posterior caracterización a fin de determinar si suproducto puede postularse como posible blanco dequimioterapia. Como resultado de esta búsqueda se identificó unnuevo gen de copia única, denominado TCGRX,cuyo productopresentó el patrón aminoacídico completo de glutarredoxinas (ers) y similitud con ers y GSl‘sde diversos organismos perono con enzimas de mamíferos. El modelado molecular de unaporción de la TCGRX sobre la Grx 3 de Escherichia coli sugiere queesta proteína tendría la estructura típica de ambas familias. En la segunda parte del trabajo, (Parte B),teniendo en cuenta laexistencia en T. cruzi de antígenos de reactividad cruzada con la GST de 26 kDa de Schistosoma japonicum (GSTsj) y que las GSTsson enzimas muy conservadas en su estructura tridimensional seplanteó la identificación de estos antígenos utilizando comoherramienta un suero anti-GSTsj y su posterior caracterización yevaluación en protocolos de inmunoprotección. Por cromatografíade inmunoafinidad con el suero anti-GSTsj se purificó unafracción a partir de epimatlgotes de T. cruzi, denominada PHGST,que presentó actividad de GST.Por otro lado, el rastreo de unabiblioteca genómica de T. cruzi con este antisuero dio comoresultado la selección de 38 clones que codificaron paraantígenos de la familia Tc13 de la superfamilia de antígenos desuperficie de tripomastigotes. la identificación de un miembro deesta familia en la cepa Tulahuén del parásito, denominado PHGST#5, permitió su comparación con los ya conocidos encuanto a su estructura aminoacídica. Mediante la hibridación decromosomas separados y transferidos a membranas, se determinóque los genes Tc13 se localizan principalmente en el cromosoma III y su homólogo. Las funciones inmunomoduladoras descriptas para ciertasproteínas de la superfamilia de antígenos de superficie y suparticipación en el desarrollo de una respuesta inmuneprotectiva, sustentó la evaluación del antígeno PHGST#5 enexperimentos de inmunoprotección en ratones de la cepa BALB/c. La inmunización plasmídica con PHGSTT#5 no indujo unarespuesta humoral específica y la respuesta celular, evaluada porefecto de hipersensibilidad retardada (DTH) frente a lainoculación con el antígeno recombinante, fue muy leve; mientrasque, la inmunización con la proteína recombinante MBP-PHGST#5indujo tanto una respuesta humoral como celular, evaluada por DTH. La inmunización plasmídica de PHGST#5, así como lainmunización con MPB-PHGST#5 produjeron una disminuciónsignificativa de la parasitemia luego del desafío con formasinfectantes del parásito. La inmunización plasmídica con PHGST#5,además disminuyó el daño y el parasitismo tisularluego del desafío. Por lo tanto, la selección de las GSTs para dirigir la definiciónde nuevos posibles blancos para el control de la transmisión de lainfección por T. cruzi permitió identificar el gen TCGRX,cuyoproducto por no poseer contraparte en el mamífero, luego de lacaracterización bioquímica podría postularse como posible blancopara el diseño de drogas tripanocidas e identificar el antígeno PHGST#5, un nuevo miembro de la familia Tc13 con posiblesepitopes compartidos con la GSTsj, y definir su efectoinmunoprotector tanto de la infección y como de la patologíachagásica.
Abstract:
Trypanosoma cruzi is the ethiological agent of Chagas’disease. Drugsthat have been utilized so far in the treatment of T. cruzi infectionhave shown colateral effects. No vaccine does exist against thisparasitosis. The objective of this thesis has been to define new possible targetsfor the control of the transmission of T. cruzi infection by means ofthe identification of parasite proteins related to Glutathion-S-Trasferases (GST)of other organisms. The selection of the GSTs to direct this screening was based on theparticipation of this enzyme in a divergent metabolism between theparasite and the mammal host and in a protective immune responseagainst the experimental infection with the parasite. These genes havenot been identified in T.cruzi yet. The identification of functional T. cruzi gene sequences whichshowed GST homology resulted from the T. cruzi Genome Project andallowed to identify a unique (single) gene copy TcGRX.The product ofthis gene showed homology to glutaredoxin (ers) and GSTs fromdifferent organisms, but no homology was found to enzymes frommammals. This characteristics support biochemical studies of TcGRXwith the purpose of postulating a new possible target for the design oftrypanocidal drugs. The utilization of an anti-GST of Schistosoma japonicum serum as atool for the identification of cross reacting antigens in T. cruzi allowedthe purification of an epimastigote fraction, which showed GST activity. The purification of this fraction was performed by immunoaffinitychromatography. The a-GSTsj serum was used to screen a T. cruzigenomic library and allowed the finding of a new member of the Tc13family. This family belongs to the denominated PHGST#5 superfamilyof trypomastigote surface antigens. This antigen showed animmunoprotective effect against the infection as well as the chagasicpathology, and was evaluated by means of both plasmid andrecombinant protein immunization.
Citación:
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García, Gabriela Andrea. (2001). Identificación y caracterización de proteínas en el Trypanosoma cruzi relacionadas con Glutatión - S - transferasas de otros organismos con el fin de definir blancos potenciales para el control de la transmisión de la infección. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3346_Garcia
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García, Gabriela Andrea. "Identificación y caracterización de proteínas en el Trypanosoma cruzi relacionadas con Glutatión - S - transferasas de otros organismos con el fin de definir blancos potenciales para el control de la transmisión de la infección". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2001.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3346_Garcia
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