Células dendríticas humanas : caracterización de su interacción con proteínas de matriz extracelular y de su capacidad inmunoreguladora

Jancic, Carolina Cristina

Registro:

Documento:	Tesis Doctoral
Disciplina:	biologia
Título:	Células dendríticas humanas : caracterización de su interacción con proteínas de matriz extracelular y de su capacidad inmunoreguladora
Autor:	Jancic, Carolina Cristina
Editor:	Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Filiación:	Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas "José de San Martín". Laboratorio de Inmunogenética
Publicación en la Web:	2017-03-01
Fecha de defensa:	2002
Fecha en portada:	2002-08
Grado Obtenido:	Doctorado
Título Obtenido:	Doctor en Ciencias Biológicas
Director:	Chuluyan, Eduardo
Idioma:	Español
Tema:	biología/inmunología
Formato:	PDF
Handle:	http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3473_Jancic
PDF:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n3473_Jancic.pdf
Registro:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n3473_Jancic
Ubicación:	Dep.BIO 003473
Derechos de Acceso:	Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Jancic, Carolina Cristina. (2002). Células dendríticas humanas : caracterización de su interacción con proteínas de matriz extracelular y de su capacidad inmunoreguladora. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3473_Jancic

Resumen:

Las células dendríticas (DC) son las más eficientes células presentadoras deantígenos y cumplen un rol central en la inducción de la respuesta inmune primaria. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la interacción de las DC con otros tiposcelulares y con la matriz extracelular (MEC); los factores que modulan dichainteracción; y la capacidad de las DC para inducir la proliferación de células T. Para ello se utilizaron DC obtenidas a partir de monocitos de sangre periférica (moDC) empleando interleuquina (IL) 4 y el factor estimulante de colonias degranulocitos y macrófagos (GM-CSF), en presencia de suero humano (SH) o suerobovino fetal (SBF). Las moDC fueron capaces de adherirse a células endoteliales obtenidas a partir devena de cordón umbilical humano (HUVEC) y a distintas proteínas de MEC. Estaadhesión fue modulada por citoquinas como el TNFα y la IL1β. Mientras que eltratamiento de las células endoteliales con TNFα indujo una mayor adhesión ymigración de moDC, el tratamiento de las moDC con dicha citoquina provocó unadisminución en la adhesión tanto a endotelio como a fibronectina (FN) y laminina (LM), pero no a colágeno tipo IV (Col tipo IV). Los efectos de esta citoquina fueronmediados por el receptor de tipo 11, cuya expresión disminuyó cuando las células setrataron con TNFα. La interacción de las moDC con HUVEC no activado fueparcialmente mediada por CD18, C029, CD49e y CD31. Por otro lado, la adhesión aproteínas de MEC fue mediada por las integrinas CD49e (para FN), CD49c y CD49f (para LM). La expresión de estas moléculas no se modificó con el tratamiento de lasmoDC con TNFα. Sin embargo, la activación de las integrinas con PMA revirtió elefecto inhibitoriodel TNFα sobre la adhesión a FN. Además de disminuir la adhesión a proteínas de MEC, el tratamiento de las moDCcon TNFα e IL1β disminuyó el contenido intracelular de AMPc. Las células noadherentes a FN presentaron menores niveles de AMPc, mayor expresión de IL12 ymejor capacidad estimuladora de linfocitos T, comparadas con las célulasadherentes. En estas moDC el aumento del contenido de AMPc utilizando uninhibidor de la fosfodiesterasa o análogos de AMPc, revirtió el efecto del TNFαsobre la adhesión a FN y sobre su capacidad inmunoestimuladora. Por otro lado, estímulos “no clásicos” como el aumento de la osmolaridadextracelular modifican ciertas propiedades de las moDC, disminuyendo su capacidadendocítica. su adhesión a proteínas de MEC y su habilidad para inducir laproliferación de linfocitos T alogeneicos. El tratamiento hiperosmolar, además,provocó una disminución en el contenido de IL12, sin modificar la expresión de lasmoléculas HLA-I, HLA-DR, CD18, CD54 y CD86. Las moDC generadas bajo diferentes condiciones de cultivo presentaroncaracterísticas particulares. Las células cultivadas en presencia de SBF (moDC-SBF)expresaron CD80 en la superficie celular a diferencia de las células cultivadasen presencia de SH (moDC-SH). Estas últimas presentaron reservoriosintracelulares de dicha molécula. Además, las moDC-SBF mostraron una mayorexpresión de IL12 y una alta eficiencia para inducir la proliferación de células Tdurante una respuesta inmune antígeno específica, comparadas con las moDC-SH. Los resultados obtenidos en el presente trabajo sugieren que el TNFα actuaría sólosobre la población de moDC que expresa el RTNF tipo II, posiblemente inactivandolas integrinas que participan en la interacción con las proteínas de MEC, lo queresulta en una menor adhesión. Además, existiría una correlación entre el contenidode AMPc y los cambios inducidos por el TNFα en las moDC, tanto en la adhesión a FN como en su capacidad inmunoestimuladora. Por otro lado, el aumento en laosmolaridad extracelular podría generar moDC con baja habilidad para estimular laproliferaciónde células T, lo cual podría estar en parte debido a la menor producciónde IL12 y la menor capacidad para incorporar antígenos bajo condicioneshiperosmolares. Finalmente, la expresión de CD80 podría depender de factorespresentes en el suero utilizado durante el cultivo de las moDC. Resumen

Abstract:

Dendritic cells (DC) are professional antigens presenting cells that play a critical rolein the induction of acquired immune responses. The aim of the present study was toanalyze the cell-DC and extracellular matrix (ECM) proteins-DC interactions. Thefactors that modulate this interactions and the immunostimulatory capacity of DCwere further examined. Monocytes derived DC (moDC) were used for these experiments. MoDC were able toadhere to endothelial cells obtained from human umbilical vein (HUVEC) and to ECMproteins. This adhesion was modulated by cytokines such as TNFα and IL1β. TNFa treated HUVEC increased moDC adhesion and migration. In contrast, TNFαtreated moDC were less adherent to endothelium, fibronectin (FN) and laminin (LM),but not to collagen type IV (Col type IV). TNFα effect was mediated through TNFreceptor II, which was downmodulated on TNFα-treated moDC. The moDC-HUVECinteraction was partially mediated by CD18, CD29, CD49e and CD31. The moDCadhesion to ECM proteins was mediated by CD49e for FN, and CD49c and CD49ffor LM. The expression of these molecules did not change on TNFα treated moDC. However, PMA reversed the inhibitory effect of TNFα on FN adhesion, probably byintegrin inactivation. TNFα also decreased the cAMP levels on moDC. Indeed, TNFα treatedcells non-adhered to FN showed lower levels of cAMP, higher IL12expression and better immunostimulatory capacity compared with FN adheredmoDC. By increasing the cAMP content with a phosphodiesterase inhibitor (IBMX) orcAMP analogues (8Br-cAMP) was possible to reverse the TNFα effect on adhesionand T-cell stimulatory capacity. Alternatively, moDC incubated with high extracellularosmolarity detached from ECM proteins and showed lower immunostimulatorycapacity, compared with cells in iso-osmolar conditions. The effect of hiperosmolaritycould be mediated by IL12, since those treated moDC showed lower level of IL12without changes in the expression of surface molecules. Some features of moDC were modified depending on the culture conditions. Cellscultured in the presence of fetal bovine serum (FBS) (moDC-FBS) expressed CD80while CD80ˉ moDC were generated by using human serum (HS) (moDC-HS). However, the moDC-HS showed intracellular expression of this molecule. Otherdifferences observed between these two moDC were the higher IL12 production andthe capacity to stimulate antigen-specific T cells of moDC-FBS, compared withmoDC-HS. Overall, these results suggest that TNFα and other non-classical stimuli act on somemoDC decreasing the adhesion, probably by modulating the activation state ofintegrins. Furthermore, cAMP levels correlate with TNFα-induced changes of moDCadhesion and allostimulatory capacity. Finally, expression of CD80 on cellularmembrane may depend on different factors present in serum, being FBS able togenerate CD80+ moDC with better immunostimulatory capacity.

Citación:

---------- APA ----------

Jancic, Carolina Cristina. (2002). Células dendríticas humanas : caracterización de su interacción con proteínas de matriz extracelular y de su capacidad inmunoreguladora. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3473_Jancic

---------- CHICAGO ----------

Jancic, Carolina Cristina. "Células dendríticas humanas : caracterización de su interacción con proteínas de matriz extracelular y de su capacidad inmunoreguladora". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2002.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3473_Jancic

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