Avances en el estudio de las funciones de p8 a través del análisis de su localización subcelular y de la identificación de sus proteínas interactoras

Valacco, María Pía

Registro:

Documento:	Tesis Doctoral
Disciplina:	quimica
Título:	Avances en el estudio de las funciones de p8 a través del análisis de su localización subcelular y de la identificación de sus proteínas interactoras
Título alternativo:	Advances in the study of the functions of p8 through the analysis of its subcellular localization and identification of its interacting partners
Autor:	Valacco, María Pía
Editor:	Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Filiación:	Laboratorio de Biología Molecular. Departamento de Química Biológica
Publicación en la Web:	2009-12-01
Fecha de defensa:	2009
Fecha en portada:	2009
Grado Obtenido:	Doctorado
Título Obtenido:	Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Biológica
Director:	Moreno de Colonna, Silvia
Director Asistente:	Varone, Cecilia L.
Jurado:	Vaccaro, M.; Pecci, A.; Lagares, A.
Idioma:	Español
Palabras clave:	P8; PROTEOMICA; LOCALIZACION SUBCELULAR; TUMORIGENESIS; INTERACTOMA; NLSP8; PROTEOMICS; SUBCELLULAR LOCALIZATION; TUMORIGENESIS; INTERACTOME; NLS
Tema:	química/química biológica biología/biología molecular y celular
Formato:	PDF
Handle:	http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4410_Valacco
PDF:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n4410_Valacco.pdf
Registro:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n4410_Valacco
Ubicación:	Dep.QUI 004410
Derechos de Acceso:	Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Valacco, María Pía. (2009). Avances en el estudio de las funciones de p8 a través del análisis de su localización subcelular y de la identificación de sus proteínas interactoras. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4410_Valacco

Resumen:

p8 es una proteína de 8 kDa que fue identificada en rata debido a su inducción durante la fase aguda de la pancreatitis. Los niveles de expresión de p8 aumentan en líneas celulares en respuesta al estrés y a factores mitogénicos. Se postula un rol importante para p8 en la progresión tumoral, ya que, al anular su expresión en fibroblastos transformados, se inhibe el desarrollo tumoral. El objetivo de este estudio es comprender más profundamente las funciones de p8 así como las vías celulares en las que está involucrada. Un análisis de homología de secuencias nos permitió identificar a p8 en diferentes especies de eucariotas superiores, y no en eucariotas inferiores. Se encontró una NLS (señal de localización nuclear) altamente conservada en su secuencia. Ensayos de inmunocitoquímica nos permitieron estudiar su localización subcelular. Observamos que se encuentra nuclear en cultivos de células subconfluentes y uniformemente distribuida en toda la célula en cultivos superconfluentes. Su importación al núcleo es dependiente de energía, y su localización depende del estadio del ciclo celular, y del estado de acetilación. Demostramos que la NLS de p8 es funcional. p8 es lo suficientemente pequeña como para difundir libremente entre el núcleo y el citoplasma. Su NLS y el estricto control de su localización, indican que formaría parte de complejos multiproteicos. Para profundizar en esta hipótesis, identificamos por abordaje proteómico las proteínas que copurifican con p8. A partir de las proteínas identificadas construimos el interactoma de p8. El análisis de este interactoma indica que p8 es una proteína multifuncional que puede interactuar con distintas proteínas con diversas funciones en diferentes compartimentos celulares.

Abstract:

p8 is an 8 kDa protein that was first identified in rat due to its induction during the acute phase of pancreatitis. Various functions related to cell growth control and stress have been attributed to p8. An important role in tumor progression was also assigned to p8 since it was observed that transformed p8-/- fibroblasts do not induce tumors when injected in nude mice. In this study we aim to understand further, the functions of p8 and to find the pathways in which it is involved. Through sequence homology analysis we identified p8 in different species of higher eukaryotes, but not in lower eukaryotes. We saw that there is a highly conserved NLS (Nuclear Localization Signal). Through immunocytochemistry, we found that p8 presents nuclear localization in sub-confluent cells, but it localizes in the cytoplasm of confluent cells. We also observed that nuclear import of p8 is energy dependent, and that its sub- cellular localization changes with the cell cycle stage and the acetylation state of the cells. We proved the functionality of its NLS. p8 is small enough to diffuse between nucleus and cytoplasm passively. The fact that it presents a NLS and a strictly controlled sub-cellular localization suggests that it is forming part of multiprotein complexes. To study this, and to identify the proteins associated to p8 we performed co purification experiments and mass spectrometry analysis. With the identified proteins we built the p8 interactome, and conclude that p8 is a multifunctional protein that is capable of interacting with different proteins associated to different pathways in different cellular compartments.

Citación:

---------- APA ----------

Valacco, María Pía. (2009). Avances en el estudio de las funciones de p8 a través del análisis de su localización subcelular y de la identificación de sus proteínas interactoras. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4410_Valacco

---------- CHICAGO ----------

Valacco, María Pía. "Avances en el estudio de las funciones de p8 a través del análisis de su localización subcelular y de la identificación de sus proteínas interactoras". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2009.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4410_Valacco

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