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Ver el documento (formato PDF)   Floccari, Mirtha Elena.  "Estudios genéticos de la biosíntesis de Poli(3-Hidroxibutirato)PHB, en Bacillus megaterium. Obtención y caracterización de mutantes y expresión heteróloga de genes phb"  (1996)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
Los polihidroxialcanoatos (PHAs) constituyen una familia compleja de polímeros, que se acumulan en el citoplasma celular de una amplia variedad de microorganismos en forma de gránulos, como material de reserva. Estos polímeros pueden ser utilizados en la fabricación de plásticos que, a diferencia de los producidos por síntesis química son termoplásticos, biodegradables y pueden biosintetizarse a partir de recursos renovables. Bacillus megateríum acumula principalmente poli(3-hidroxibutirato), PHB, un homopolímero lineal de D(-)-3-hidroxibutirato. La estructura del gránulo, así como los mecanismos involucrados en su formación son poco conocidos. En este trabajo se obtuvo una colección de mutantes de Bacillus megaterium deficientes en la biosíntesis de PHA, con inactividad de la enzima PHA sintasa. A continuación, se estableció, un sistema de estudio de genes pha heterólogos en una bacteria que acumula el polímero en forma natural. Para ello se introdujo el gen que codifica para la enzima PHA sintasa de Alcaligenes eutrophus en las mutantes PHA negativas obtenidas, utilizando como vector de subclonado el plásmido “shuttle” pATl9. Por último y para contribuir al conocimiento sobre los roles de las proteínas asociadas al gránulo y sus interacciones en la formación del mismo, se aplicó este sistema de estudio al análisis de la interacción de la proteína de Mr 22 de B. megateríum, propuesta como un factor estructural de importancia en la formación de estas inclusiones, en B. megaterium, con gránulos sintetizados por la PHA sintasa de A. eutrophus. Los resultados obtenidos revelaron que esta proteína puede asociarse a los gránulos formados por la sintasa heteróloga.

Abstract:
The polyhydroxyalkanoates (PHAs) are a group of polymers that accumulate in the bacterial cytoplasm forming inclusions called granules. These polymers, biosynthesized from removable resources, can be used as biodegradable plastics. Bacillus megaterium accumulates poly(3-hydroxybutyrate) PHB, a linear homopolymer of D(-)-3-hydroxybutyrate. The granule structure and the biochemical mechanisms involved in their synthesis are not completely understood. In this work a collection of B. megaterium mutants deficient in PHB synthesis was obtained. None of them showed PHA synthase activity. A system was developed for the study of heterologous genes, using these mutants and the Gram positive and negative bacterial shuttle plasmid pAT19, as cloning vector. In an attempt to understand the role of granule associated proteins and their interactions, this system was used to analyze if the 22 Mr protein of B. megaterium, that is supposed to perform the role of a structural protein, could be associated with PHA granules synthesized by the Alcaligenes eutrophus synthase. The results showed an association to the granules, whose synthesis was directed by an heterologous synthase.

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Registro:
Título : Estudios genéticos de la biosíntesis de Poli(3-Hidroxibutirato)PHB, en Bacillus megaterium. Obtención y caracterización de mutantes y expresión heteróloga de genes phb     =    Studies on the biosynthesis of Poly(3-Hydroxybutyrate), PHB, in Bacillus megaterium. Isolation and characterization of mutants and heterologous expression of phb genes
Autor : Floccari, Mirtha Elena
Director : Méndez, Beatriz Silvia
Año : 1996
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Departamento de Química Biológica
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_2818_Floccari
Idioma : Español
Area Temática : 
Palabras claves : POLI(3-HIDROXIBUTIRATO); MUTANTES; SINTASA; PROTEÍNAS ASOCIADAS AL GRÁNULO; POLY(3-HYDROXYBUTYRATE) ; MUTANTS; SYNTHASE; GRANULE ASSOCIATED PROTEINS
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