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Ver el documento (formato PDF)   Del Valle Paz, Cristina.  "Mecanismo de acción de ACTH : purificación, caracterización y función del sustrato endógeno de la Proteína Quinasa AMPc dependiente"  (1996)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
Trabajos previos sugerían la presencia en tejidos esteroidogénicos de una proteína soluble ACTH-y AMPc-dependiente capaz de estimular la síntesis de esteroides. En este trabajo se describe la purificación a homogeneidad de esta proteína y su caracterización. Apartir de zona fasciculata de adrenales de ratas tratadas con ACTH, y mediante cromatografías en columnas de DEAE-celulosa, Sephadex G-100, Mono Q-HPLC y Superosa-HPLC y un procedimiento de elución de proteínas de geles de poliacrilamida, se purificó una proteína de 43 kDa (p43) capaz de estimular "in vitro" la síntesisde esteroides. El efecto de p43 es dosis dependiente y es bloqueado por inhibidores de la fosfolipasa A2 (PLA2). La microsecuenciación peptídica demostró que p43 es una proteína novel. Anticuerpos anti-péptidos sintéticos bloquearon la actividad esteroidogénica de p43, lo que demuestra que la secuencia determinada corresponde a la proteína bioactiva. Ademas todos los anticuerpos obtenidos reconocieron a la proteina desnaturalizada. p43 es una fosfoproteína con varios sitiosde fosforilación y el grado de fostorilación de la misma se halla bajo control hormonal, lo cual sugiere que la fosforilación de p43 se produce a través de mecanismos que involucran la activación de la proteína quinasa AMPc dependiente (PKA) mediada por ACTH. p43 puede ser fosforilada "in vitro" por PK A, lo cual refuerza la hipótesis planteada. Se concluye que p43 es una novel fosfoproteína intermediaria en la estimulación de la sintesis de esteroides inducida por ACTH y que su mecanismo de acción posiblemente involucre, directa o indirectamente, la activación de una PLA2.

Abstract:
Previous reports have suggested the presence of a soluble protein that responds to CAMP signals to induce steroid synthesis in adrenocortical tissue. This work describes the purification of this protein from adrenal zone fasciculata cells and its characterisation. A five-step procedure that includes DEAE-cellulose, gel filtration, Mono Q and Superose-HPLC, and elution of the protein from SDS-PAGE was used. This procedure results in the purification to homogeneity of a protein of 43 kDa molecular mass which retains the capacity to stimulate steroid synthesis in an "in vitro" recombination assay. The stimulatory effect of p43 is dose-dependent and is inhibited by the use of phospholipase A2 inhibitors. p43 was subjected to aminoacid microsequencing. A series of antibodies was generated against synthetic peptides that match some of the partial sequences obtained from p43. Some of the antibodies block the steroidogenic activity of p43, demonstrating that the sequence corresponds to the bioactive protein. The antibodies bind also to the protein in its denatured form. p43 is a phosphoprotein exhibiting various phosphorylation sites, and its phosphorylation status is under hormonal control. These observations sustained by the fact that p43 can be phosphorylated "in vitro" by cAMP dependent protein kinase. It is concluded that p43 is a novel phosphoprotein, intermediary in the stimulation of steroid synthesis induced by ACTH, and that its mechanism of action involves, either directly or indirectly, the activation of PLA2.

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Registro:
Título : Mecanismo de acción de ACTH : purificación, caracterización y función del sustrato endógeno de la Proteína Quinasa AMPc dependiente     =    Mechanism of action of ACTH : purification, characterisation and function of the endogenous substrate of the cAMP-dependent Protein Quinase
Autor : Del Valle Paz, Cristina
Director : Podestá, Ernesto Jorge
Año : 1996
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_2890_DelVallePaz
Idioma : Español
Area Temática : 
Palabras claves : ACTH; PROTEÍNA QUINASA AMPC DEPENDIENTE; ESTEROIDOGÉNESIS ; ZONA FASCICULATA; FOSFOLIPASA A2; ACTH; CAMP-DEPENDENT PROTEIN KINASE; STEROIDOGENESIS; ADRENAL ZONE FASCICULATA; PHOSPHOLIPASE A2
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