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Ver el documento (formato PDF)   Capelluto, Daniel G.S..  "Estudio de la serina hidroximetiltransferasa de tripanosomátidos (Crithidia Fasciculata y Trypanosoma cruzi) : Purificación y propiedades cinéticas y físico-químicas"  (1997)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
La serina hidroximetiltransferasa (SHMT) cataliza la interconversión de serina y glicina transfiriendo una unidad carbonada al tetrahidrofolato requerida para la síntesis de purinas, timidilato, metionina y colina. La mayor parte de las SHMTs estudiadas son dependientes de piridoxal-5'-fosfato(PLP). La SHMT en eucariontes existe como isoformas mitocondrial y citosólica, codificadas por genes diferentes. También ha sido demostrada una tercera SHMT, presente en cloroplastos. El presente trabajo es el primero que informa la purificación y caracterización de una SHMT a partir de tripanosomátidos y en particular, se demuestra la presencia de tres formas moleculares de la enzima (las cuales se designaron SHMT I, II y III) en Crithidia fasciculata. Las isoformas fueron purificadas a homogeneidad de acuerdo al análisis por SDS-PAGE. Los pesos moleculares nativos de las SHMTs I, II y III, calculados por el método de Andrews, dieron valores de 226, 173 y 211 kDa, respectivamente. Los pesos moleculares de sus subunidades fueron: 53,8, 50,7 y 51,7 kDa respectivamente, sugiriendo una estructura homotetramérica de las proteínas, coincidente con las SHMTs de hongos, plantas y mamíferos. Las tres isoformas fueron dependientes de PLP, aunque presentaron diferentes comportamientos cinéticos. También fue parcialmente purificada y caracterizada la SHMT de Trypanosoma cruzi. Se ha detectado una sola forma de la enzima en este parásito, utilizando la misma metodología. La SHMT, de 69 kDa, fue altamente inestable, aunque presentó,en algunos casos, similares propiedades a las estudiadas en C.fasciculata. Por otra parte, fue parcialmente purificado y caracterizado un inhibidor endógeno de la SHMT a partir de T.cruzi, similar al aislado de semillas de Vigna radiata.

Abstract:
Serine hydroxymethyltransferase (SHMT) catalyzes the interconversion of serine and glycine, with tetrahydrofolate serving as the C1 acceptor, the latter is required for the biosynthesis of purines, thymidylate, methionine and choline. Most SHMTs studied require pyridoxal-5'-phosphate (PLP) as a cofactor. SHMT exists as both cytosolic and mitochondrial isoforms encoded by separate genes. A third isoform has been shown in chloroplasts from plants. The present work reports on the first isolation and characterization of SHMT from Trypanosomatids, and particularly the evidence for the presence of three isoforms of the enzyme (SHMTs I, II and III) in Crithidia fasciculata, which were purified to homogenity according to SDS-PAGE analysis. The native molecular weight of SHMTs I, II and III, calculated by Andrews’ method, gave values of 226, 173 and 211 kDa respectively. The subunit molecular weights of them were 53.8, 50.7 y 51.7 respectively, suggesting a homotetrameric structure, similar to those of yeast, fungi, plants and mammalian SHMTs. All molecular forms were dependent on PLP, but they exhibited different kinetic behaviour. We have also partially purified and characterized the SHMT from Trypanosoma cruzi; we have been able to detect only one molecular form from this source using the same method. The 69 kDa SHMT was very unstable, but it had similar properties to those of C.fasciculata. A naturally occurring inhibitor of SHMT in T.cruzi was also partially purified and characterized, and it was similar to that reported in Vigna radiata seedlings.

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Registro:
Título : Estudio de la serina hidroximetiltransferasa de tripanosomátidos (Crithidia Fasciculata y Trypanosoma cruzi) : Purificación y propiedades cinéticas y físico-químicas    
Autor : Capelluto, Daniel G.S.
Director : Cannata, Joaquín J.B.
Director Asistente : Cazzulo, Juan J.
Año : 1997
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana
Centro de Investigaciones Bioenergéticas (CIBIERG)
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_2901_Capelluto
Idioma : Español
Area Temática : 
Palabras claves : SERINA HIDROXIMETILTRANSFERASA; CRITHIDIA FASCICULATA; TRYPANOSOMA CRUZI; PURIFICACION; INHIBIDOR; SERINE HYDROXYMETHYLTRANSFERASE; CRITHIDIA FASCICULATA; TRYPANOSOMA CRUZI; PURIFICATION; INHIBITOR
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