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Ver el documento (formato PDF)   Mac Intosh, Gustavo Carlos.  "Quinasa de proteínas dependiente de Calcio de Solanum tuberosum, L. y su relación con la tuberización"  (1997)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
Se purificó a homogeneidad una quinasa de proteínas dependiente de calcio (CDPK) de fracciones solubles de plantas de papa, (Solanum tuberosum L.). La CDPK de papa es estrictamente dependiente de calcio (K0,5= 0,6 μM) y fosforila una amplia variedad de sustratos, entre los cuales el syntide 2 es el mejor aceptor de fosfatos (Km = 33 μM). La quinasa es inhibida por quelantes de calcio, derivados de fenotiazina y W7 (IC50= 0,25 mM). Anticuerpos policlonales dirigidos contra el dominio regulatorio de la CDPK de soja reconocen un polipéptido de 53 kDa en las fracciones purificadas de papa. En ensayos de autofosforilación la misma banda aparece fuertemente marcada con ATP en presencia de calcio. La actividad de CDPK es alta en plantas no inducidas a tuberizar, pero aumenta 2.5 veces en el comienzo del desarrollo del tubérculo y disminuye a la mitad de la actividad de las plantas no inducidas cuando el tubérculo está completamente formado. Se observó fosforilación dependiente de calcio de sustratos endógenos específicos de los estadios tempranos de formación del tubérculo (bandas de 68, 51 y 46 kDa). Estos polipéptidos no aparecieron en plantas no inducidas ni el tubérculos maduros. indicando que éste es un evento específico de los primeros estadios. Además se detectó la defosforilación de un polipéptido específico en las plantas inducidas, lo que sugiere la existencia de fosfatasas. La preincubación de los extractos crudos de estas plantas con inhibidores de fosfatasas produjo un aumento del 100 % en la actividad de CDPK. El ácido jasmónico, propuesto como inductor de tuberización no indujo este proceso cuando se agregó a los medios de cultivo de plantas cultivadas in vitro. Produjo un aumento del crecimiento de plantas en bajas concentraciones y una inhibición del crecimiento al tratar las plantas con altas concentraciones. Además produjo una disminución en la actividad de CDPK de las plantas tratadas en forma dependiente de la concentración. La sacarosa es esencial para la tuberización. Plantas tratadas con altas concentraciones (8 %) de este azúcar presentaron un importante aumento en la actividad de CDPK y en la actividad de fosfatasas de proteínas capaces de defosforilarsustratos de la quinasa. Nuestros resultados sugieren que la CDPK y fosfatasas asociadas participan en el control de los primeros estadios de tuberización y que la sacarosa probablemente interviene en esta regulación modulando la actividad de estas enzimas. El ácido jasmónico no tendría participación en los eventos tempranos de la formación del tubérculo.

Abstract:
A soluble Ca²+-dependent protein kinase(CDPK) was purifled to homogeneity in potato (Solanum tuberosum, L.) plants. Potato CDPK was strictly dependent on Ca²+ (K0,5=0,6 μM) and phosphorylated a wide diversity of substrates, in which syntide 2 was the best phosphate acceptor (Km= 33 μM). The kinase was inhibited by Ca²+ -chelating agents, phenotiazine derivatives, and W7 (IC50= 0,25 mM), polyclonal antibodies directed against the regulatory region of the soybean CDPK recognized a 53 kD polypeptide. In an autophosphorylation assay, this same band was strongly labeled with ATP in the presence of Ca²+. CDPK activity was high in nontuberized plants, but increased 2.5 fold at the onset of tuber development and was reduced to one-half of its original activity when the tuber had completed formation. In the early stages of tuberization, Ca²+-dependent phosphorylation of endogenous targets (specific bands of 68, 51, and 46 kD) was observed. These polypeptides were not labeled in nontuberizing plants or in completely formed tubers, indicating that this phosphorylation is a stage-specific event. In addition, dephosphorylation of specific polypeptides was detected in tuberizing plants, suggesting the involvement of a phosphatase. Preincubation of crude extracts with phosphatase inhibitors rendered a 100% increase in CDPK activity. Jasmonic acid, proposed as a tuber inductor, was unable to induce this process when added to in vitro cultured plants media. An increase of plant growth at low concentration, and an inhibition of growth at high concentration was observed. In addition, CDPK activity decreased in all treatments in a concentration-dependent way. Sucrose was essential for tuberization. CDPK activity increased in plants treated with high sucrose concentration (8 %). An increase in phosphatase activity was also observed. Our results suggest that CDPK and associated phosphatases could participate in the control of early stages of tuberization, and sucrose might regulate the activity of these enzymes. Jasmonic acid would not be involved in these early events in tuber development.

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Registro:
Título : Quinasa de proteínas dependiente de Calcio de Solanum tuberosum, L. y su relación con la tuberización     =    Potato (Solanum tuberosum, L.) calcium-dependent protein kinase and its relation with tuberization
Autor : Mac Intosh, Gustavo Carlos
Director : Téllez de Iñon, María Teresa
Año : 1997
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular (INGEBI)
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_2917_MacIntosh
Idioma : Español
Area Temática : 
Palabras claves : QUINASA DE PROTEINAS DEPENDIENTES DE CALCIO; TUBERIZACION; SACAROSA; ACIDO JASMONICO; TRANSDUCCION DE SEÑALES; SOLANUM TUBEROSUM; CALCIUM DEPENDENT PROTEIN KINASE; TUBERIZATION; SUCROSE; JASMONIC ACID; SOLANUM TUBEROSUM; SIGNAL TRANSDUCTION
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