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Ver el documento (formato PDF)   Aguirre Ghiso, Julio A..  "Eventos de señalización intracelular en células tumorales y su relación con la invasión y metástasis"  (1997)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
El proceso de invasión y metástasis involucra múltiples factores tanto del huésped como del la célula tumoral. El proceso de invasión se asocia con una alta capacidad migratoria de las células neoplásicas así como con una sobreexpresión de proteasas. En numerosos modelos tumorales y estudios clínicos se ha demostrado la importancia, de las proteasas como el activador del plasminógeno tipo uroquinasa (uPA) y las metaloproteasas (MMP) en el proceso de invasión y metástasis. Sin embargo existe poca información acerca de los procesos que regulan la expresión de estas proteasas en células tumorales. También es claro que la capacidad migratoria que las células tumorales muestran depende de alteraciones en la capacidad de las mismas de adherirse a determinados substratos de la matriz extracelular así como de organizar correctamente su citoesqueleto. Relativo a este último punto, no se conocen en su totalidad las vias de señalización que controlan estos procesos en células tumorales. Se ha demostrado que la transformación con oncogenes que codifican proteínas señalizantes activadas constitutivamente como el v-Ras o v-Src llevan a la sobreproducción de las proteasas antes mencionadas. Asimismo la sobreexpresión de otras enzimas señalizantes como la proteína quinasa C (PKC) también pueden llevar a sobreexpresión de algunas de estas proteasas. Se ha demostrado también como estos mismos oncogenes pueden inducir una mayor capacidad migratoria y una independencia del anclaje para el crecimiento de las células transformadas. Por lo tanto es posible que las señales intracelulares que activan estos y muchos otros oncogenes lleven en forma conjunta, a través de la progresión tumoral, a un aumento de la proliferación, de la migración y de la producción de proteasas. Estos oncogenes y la PKC también activan una vía de señalización conocida como la vía mitogénica clásica que involucra entre otros componentes a la fosfolipasa D (PLD), Raf-1, MEK-1 y ERK1(MAPK o quinasa activadas por mitógenos). En el presente trabajo de tesis se han analizado en una primer etapa, los efectos del alcohol n-butanol, el cual puede funcionar como un inhibidor de la PLD y de la PKC, sobre la organización del tumor primario y sobre la actividad proteolítica asociada a células de un adenocarcinoma de mama murino (LM3). En una segunda etapa se intento establecer puntualmente si la vía de la PLD y/o de la PKC junto con otras vías de señalización, participan en la señal regulatoria que controla la sobreproducción de uPA en las células LM3. Finalmente se analizó si esta misma vía de señalización esta involucrada en la organización del citoesqueleto de actina y de la agrupación de integrinas en puntos de adhesión focal, durante la extensión (spreading) sobre distintos substratos de las células LM3. En la presente tesis hemos demostrado que: A) la capacidad extractiva y, posiblemente la función inhibitoria del n-butanol sobre las enzimas señalizantes antes mencionadas, generó una disminución en la capacidad tumorigénica de las células LM3 así como una disminución en la capacidad no solo de unir específicamente uPA a sus membranas sino también de secretar tanto uPA como MMP-9. B) Por primera vez demostramos que efectivamente la inhibición de la vía de la PLD y de la PKC es capaz de reducir la sobreproducción tanto endógena de uPA como la inducida por agonistas o factores de crecimiento en las células LM3. En esta misma etapa demostramos que existen, operando en forma paralela a la vía antes descripta, otras señales dependientes de tirosina-quinasas y de la PLD, pero independientes de la PKC, en el control de la sobreproducción de uPA. C) Demostramos que el spreading de las células LM3 sobre diferentes substratos y la organización del citoesqueleto de actína y de las integrinas β1 es regulada también por una vía dependiente de PLD/PKC y de tirosina-quinasas. D) Finalmente demostramos que la inhibición de la vía de la PLD/PKC reduce dramáticamente la capacidad metastásica experimental de las células LM3 en ratones BALB/c, correlacionando con la inhibición de los procesos celulares antes mencionados. Los resultados presentados en este trabajo de tesis demuestran por primera vez, con un enfoque experimental farmacológico, la participación de una vía dependiente de la PLD y de la PKC en el control de eventos críticos asociados con el fenotipo invasivo y metastásico, como la producción de uPA, de MMPs y de la organización del citoesqueleto y estructuras de adhesión durante eventos mótiles in vitro y con la capacidad metastásica in vivo. Finalmente nuestros resultados cuadran con la creciente bibliografía indicando que la activación de la vía mitogénica clásica no solo controla la proliferación sino que transduce lo que podría denominarse como la "señal invasiva".

Abstract:
The production of urokinase (uPA) and the migratory capacity of tumor cells are critical processes during invasion and metastasis. We have studied if the signaling pathways dependent on phospholipase D (PLD), protein kinase C (PKC) and tyrosine-kinases are involved in the control of urokinase overproduction in mammary tumor cells (LM3) as well as in the regulation of tumor cell spreading. Results: A) The extractive capacity of n-butanol and, possibly its inhibitory effect onsignal transduction, reduced the tumorigenicity of tumor cells and their capacity to bind and secrete uPA as well as to secrete metalloproteinase-9. B) We describe for the first time that the inhibition of the PLD/PKC pathway renders an inhibition of the endogenous, agonist and growth factor-stimulated overproduction of uPA in LM3 cells. In addition we found that a tyrosine-kinase-dependent pathway controls, coincidentally with the previous pathway uPA overproduction, but in a PLD-dependent and PKC-independent manner. C) We have found that the PLD/PKC pathway controls the spreading of LM3 cells on fibronectin and collagen IV dependent on f-actin cytoskeleton and β1-integrin point contact adhesion structures organization. D) Finally we have found that the inhibition of the PLD/PKC pathway renders a dramatic decrease of the metastatic ability of LM3 cells in BALB/c mice demonstrating the in vivo relevance on the modulation of this pathway.

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Registro:
Título : Eventos de señalización intracelular en células tumorales y su relación con la invasión y metástasis     =    lntracellular signaling events in tumor cells and its relationship with the invasion and metastasis process
Autor : Aguirre Ghiso, Julio A.
Director : Bal de Kier Joffé, Elisa
Año : 1997
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Departamento de Biología Celular. Área de Investigación
Instituto de Oncología "Angel H. Roffo"
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_2983_AguirreGhiso
Idioma : Español
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