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Ver el documento (formato PDF)   Alonso, Claudio Roberto.  "Identificación y análisis funcional de los factores que regulan la transcripción del gen de fibronectina humana"  (1998)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
El presente trabajo de tesis esta centrado en el estudio de la region promotora del gen de la fibronectina humana (FN). En primer lugar se han definido los roles funcionales in vitro e in vivo de los elementos FN-CRE y FN-CCAAT. Ambos enfoques coincidieron en definir a los factores CRE y CCAAT como moduladores positivos de la actividad transcripcional del gen FN. Mediante experimentos de inmuno-precipitacion y retardo en gel se identificaron las proteinas NF-I y CPI como los factores hepaticos que se unen al elemento FN-CCAAT. Posteriormente a traves de la implementacion de una nueva metodología que combina la inmunoprecipitación con el entrecruzamiento covalente por luz U.V. se detectó la interacciín física entre la proteína de union a CRE, ATF-2 y los factores CCAAT, CPI y NF-I. Debido a la importancia fisiológica de los cambios cuali y cuantitativos en la expresion de la fibronectina vinculados a procesos de fibrosis hepática, se caracterizaron los factores que se unen al elemento FN-CRE en diferentes tipos celulares hepaticos. Los resultados mostraron que los factores ATF-2 y ATF-3 ocupan el elemento solo en hepatocitos, mientras que otros factores, como la proteina FRA-2 ocupan el elemento CRE tanto en hepatocitos como en celulas endoteliales sinusoidales (SEC). Experimentos de transfección transitoria de cultivos primarios de hepatocitos y SEC, permitieron definir elementos enhancer y silencer dentro del promotor asi como la region necesaria para conferir inducibilidad al factor de crecimiento TGF-β. Estos resultados proveen las primeras evidencias de una ocupacion y funcionamiento diferenciales del promotor FN específicos de tipo celular hepático.

Abstract:
The present work was focused in the study of the promoter region of the human fibronectin gene (FN). First, we defined the in vitro and in vivo functional roles of the FN-CRE and FN-CCAAT elements. Both approaches have agreed to define the CRE and CCAAT factors as positive modulators of the transcriptional activity of the FN gene. Through immunoprecipitation and gel shift experiments the proteins NF-I and CPI were identified as the liver factors that bind the FN-CCAAT element. Thanks to the development of a new methodology that combines immunoprecipitation and UV crosslinking techniques, it was possible to define the physical interaction among the CRE protein ATF2 and the CCAAT factors NF-I and CPI. In virtue of the physiological relevance of the qualitative and quantitative changes in the FN expression associated with hepatic fibrosis, the factors that bind the FN-CRE element in different liver cell types were characterized. Results showed that factors ATP-2 and ATP-3 bind the element only in hepatocytes, while other factors, such as FRA-2 were present in both hepatocytes and sinusoidal endothelial cells (SEC). Transient transfection experiments carried out on primary cultures of hepatocytes and SEC, allowed to define enhancer and silencer elements within the promoter, as well as the minimal region needed to confer inducibility to the growth factor TGF-B.These results provide the first evidences of a differential occupation and function of the FN promoter specific of liver cell types.

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Registro:
Título : Identificación y análisis funcional de los factores que regulan la transcripción del gen de fibronectina humana     =    Identification and functional analysis of factors that regulate the transcription of the fibronectin gene
Autor : Alonso, Claudio Roberto
Director : Kornblihtt, Alberto Rodolfo
Año : 1998
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular (lNGEBI)
Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular (LFBM)
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_2995_Alonso
Idioma : Español
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