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Ver el documento (formato PDF)   Calamante, Gabriela.  "Utilización del virus X de la papa como vector de expresión transitoria en plantas"  (1998)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
El virus X de la papa (PVX) es el miembro tipo del grupo potexvirus. En este trabajo de Tesis se obtuvo una copia de ADNc completa e infectiva de PVX. Además, se evaluó la capacidad de PVX como vector de expresión transitoria en plantas. Se obtuvieron vectores virales de reemplazo e inserción capaces de expresar el gen bacteriano uid A. En el primer caso, se reemplazó el gen de la cápside (CP) por el gen marcador, y se evaluó en experimentos de complementación. Sólo se observó actividad de la enzima β-glucuronidasa (GUS) en ensayos de co-inoculación con viriones de PVX purificados. La actividad de GUS estuvo restringida a pocas células en la hoja inoculada. En el segundo caso, se obtuvo un vector de inserción donde el gen uíd A se expresó a partir de una duplicación del promotor subgenómico de CP y se observó actividad de GUS en las hojas inoculadas. También se obtuvo y evaluó un vector de inserción para expresar el gen del factor de crecimiento epidermal humano. Finalmente, se obtuvieron herramientas necesarias para implementar un sistema de trans-complementación entre plantas transgénicas que expresaban la replicasa de PVX y construcciones derivadas de PVX defectivas en la replicación.

Abstract:
Potato virus X (PVX) is the type member of the potexvirus group. In this Thesis an infections, full-length cDNA copy of PVX genome was obtained. Besides, the suitability of PVX as a transient expression vector in plants was evaluated. Replacement and insertion viral vectors able to express the uid A bacteria] gene, was developed. The first, in which the viral coat protein (CP) gene was replaced by the reporter gene, was evaluated in complementation assays. β-glucurunidase (GUS) activity was only detected in co-inoculation experiments with purified PVX virions. GUS activity was restricted to small areas of the inoculated leaves. The insertion vector was able to express uid A from a duplicated CP subgenomic promoter. GUS activity was only detected on the inoculated leaves. The insertion vector was also used to express the human epidermal growth factor gene in tobacco plants. Finally, a trans-complementation system was designed. Transgenic tobacco plants expressing the PVX replicase gene were obtained, and four replication defective versions of PVX were constructed. These tools will be used in the future to perform complementation assays in tobacco protoplasts and plants.

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Registro:
Título : Utilización del virus X de la papa como vector de expresión transitoria en plantas    
Autor : Calamante, Gabriela
Director : Mentaberry, Alejandro
Año : 1998
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular, "Dr. Héctor N. Torres" (INGEBI)
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3036_Calamante
Idioma : Español
Area Temática : Biología / Ingeniería Genética
Palabras claves : PVX; POTEXVIRUS; VECTOR VIRAL; VECTOR DE EXPRESION VEGETAL; PVX; POTEXVIRUS; VIRAL VECTOR; PLANT EXPRESSION VECTOR
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