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Ver el documento (formato PDF)   Berensztein, Esperanza Beatriz.  "Cultivo primario de células testiculares prepúberes humanas: Cambios madurativos de la regulación de la esteroidogénesis"  (1998)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
La regulación de la fase postnatal temprana de activación testicular así como de la posterior quiescencia en humanos es poco conocida. Tanto la secreción de hormonas hipofisarias como la composición celular del testículo correspondiente a la fase postnatal temprana son diferentes al testículo adulto. El objetivo fundamental del presente trabajo de tesis fue desarrollar el cultivo primario de células testiculares humanas provenientes de necropsia. Se estudiaron 50 testículos de pacientes neonatales (grupo 1, G1), de la etapa de activación postnatal (G2), de la etapa de quiescencia testicular (G3) y puberales (G4). El estudio de la secreción de testosterona (T), marcador de células de Leydig, en función del tiempo post mortem (tpm) encontró que el tpm debe ser de hasta 24 horas, ya que a tpm mayores no hay T y se activa la enzima aromatasa. Se comparó la T basal y la respuesta a gonadotrofinas en los 4 grupos, hallándose que la T basal es significativamente mayor en G1 y G2 que en G3 (p<0.05) y que sólo GZ responde a gonadotrofinas. Se encontró que Ia actividad estimada de las enzimas 17β-HSD, 3β-HSD y 17,20 liasa de la P450c17, fue significativamente mayor en G2 que en G3 y que 17β-HSD y 3β-HSD están más activas que 17,20 liasa. Por análisis con precursores tritiados de las vias Δ4 y Δ5 e identificación de metabolitos producidos por cromatografía en capa delgada se observó que la vía Δ5 es preferencial en testículo humano prepúber. Se observó un aumento de T en ausencia de gonadotrofinas bajo GH en G2 y bajo IGF-1 en los 4 G. Se estudió la secreción de inhibina-B, marcador de célula de Sertoli, encontrándose una disminución con la edad durante la prepubertad, un aumento en paralelo a la T y un efecto estimulador de FSH. Por el método de subcultivos y criopreservación de células testiculares humanas de necropsia, se encontró T, bajo colesterol ó pregnenolona, indicando que las enzimas esteroidogénicas están preservadas. El modelo experimental desarrollado ha demostrado además ser útil para estudiar la fisiopatogenia de diversas alteraciones de la función testicular en los niños.

Abstract:
The regulation of the ear1y postnatal activation and subsequent quiescence in human testicular development is poorly understood. The secretion of pituitary hormones and the testicular cell composition in prepubertal are different than adult men. The main aim of this study was to develop the primary culture of human testicular cells obtained from necropsy. A total of fifty testes was studied and divided into: neonatal stage or group 1 (G1), postnatal activation stage (G2), stage of quiescence (G3) and pubertal stage (G4). Testosterone secretion (T), as marker of Leydig cell function, was related with post mortem hours (pmh). It was found that pmh must be less than 24 hours, because at pmh a higher T dissapeared and aromatase activity increased. Basal T and response to gonadotrophins were analyzed in the 4 groups. Basal T was significantly higher in G1 and G2 than in G3 (p<0.05), and only in G2 an increment of T was found under LH/FSH. Seventeenβ-HSD, 3β-HSD and the 17,20 lyase of P450c17 activities were estimated in G2 and G3 and it was found that the three activities were higher in G2 than in G3, and 17β-HSD, 3β-HSD were more activated than 17,20 lyase. The analysis of the two pathways of steroidogenesis Δ5 and Δ4, studied after the incubation with radiolabeled precursors and the identification of products by TLC, showed that the preferential pathway is the Δ5. The stimulating effect of factors other than gonadotrophins was studied. An increment of T under GH in G2 and under IGF-1 in the four groups in the abscence of LH/FSH was observed. Inhibin-B secretion, as marker of Sertoli cells, was studied. A negative correlation between Inhibin-B secretion and age during prepuberty was found. Moreover, a positive correlation between Inhibin-B and T and a stimulating effect of FSH on Inhibin-B secretion was also shown. Human testicular cells obtained from necropsies were subcultured and cryopreserved and their ability to secrete T was maintained, under cholesterol or pregnenolone, showing that steroidogenic enzymes were preserved. The present model of human testicular cells in culture was found to be useful to study the physiopathogenesis of some alterations of testicular function in boys.

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Registro:
Título : Cultivo primario de células testiculares prepúberes humanas: Cambios madurativos de la regulación de la esteroidogénesis     =    Human prepubertal testicular cells in culture: Madurative changes in steroidogenic regulation
Autor : Berensztein, Esperanza Beatriz
Director : Rivarola, Marco A.
Director Asistente : Belgorosky, Alicia
Consejero : Maggese, Maria Cristina
Año : 1998
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Departamento de Biología
Hospital de Pediatría Garrahan
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3083_Berensztein
Idioma : Español
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