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Ver el documento (formato PDF)   Morvillo, Verónica.  "Influencia hormonal en el desarrollo del melanoma maligno humano"  (1999)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
El melanoma es una neoplasia que surge como consecuencia de la proliferación descontrolada de los melanocitos. El comportamiento de este tipo tumoral es impredecible dado que puede variar desde la regresión espontánea hasta una rápida progresión y muerte del portador del tumor. El aumento de la incidencia de esta enfermedad se halla entre las más altas, y hasta el momento no se han desarrollado terapias que sean realmente efectivas. Varios estudios, han demostrado que el desarrollo del melanoma de piel es más desfavorable en pacientes hombres que en mujeres, y que la supervivencia de las mujeres es considerablemente mayor. Ha sido teóricamente propuesto que los andrógenos tienen un papel clave en el peor pronóstico masculino, y que una terapia con antiandrógenos podría tenerse en consideración en pacientes hombres con melanoma. En este trabajo de Tesis se investigó, en primer lugar, la presencia de receptores androgénicos (RA) en el melanoma humano, se procedió luego a la caracterización bioquímica y biológica de los mismos y por último se analizó la influencia de la acción antiandrogénica en el curso clinico de esta enfermedad. En los estudios realizados se utilizaron tres lineas derivadas de melanoma humano obtenidas en el laboratorio: IIB-MEL-J, IIB-MEL-LES e IIB-MEL-LAN. Los análisis de Scatchard de las tres lineas estudiadas, utilizando la unión del andrógeno sintético marcado R1881, revelaron la presencia de un solo tipo de receptor con una constante de disociación aparente (Kd) de 11 nM a 37 °C y una capacidad de binding de 326 fmol/mg de proteina, 58,4 fmol/10 6 células o de 35.000 sitios por célula para IIB-MEL-J, una Kd de 15 nM a 37 °C y una capacidad de binding de 280,6 fmol/mg de proteína, 30,8 fmol/10 (6)células o de 18.500 sitios por célula en el caso de IIB-MEL-LES y Kd de 14 nM a 37 °C, capacidad de binding de 206,4 fmol/mg de proteína, 25,59 fmol/10 (6) células o de 15.400 sitios por célula en el caso de IIB-MEL-IAN. Los estudios sobre la especificidad de la unión del ligando radiactivo a estos receptores, revelaron un comportamiento atípico de los mismos en las tres líneas analizadas. No sólo los andrógenos testosterona (T), dihidrotestosterona (DHT), R1881 y el antiandrógeno hidroxi-flutamida (OH-Flu) compitieron con R188l, sino que estradiol (E2), progesterona (Pg) y cortisol (F), a 500 X de exceso, también fueron capaces de desplazar la unión del esteroide sintético al RA. A nivel inmunocitoquímico, no existieron evidencias de la presencia de receptores estrogénicos o de progesterona en las tres líneas de melanoma, mientras la inmuno- reactividad para RA fue positiva en las tres líneas estudiadas. La tinción nuclear fue vigorosa, y la intensidad marcada, por encima del 70% de las células analizadas. La presencia del RA fue analizada, además, en biopsias correspondientes a metástasis de melanomas provenientes de distintos pacientes. En todos los casos la reactividad obtenida con el anticuerpo monoclonal (AMC) ANI-IS fue positiva y la intensidad marcada. Estudios in vitro sobre la acción de distintas hormonas y antihormonas revelaron que DHT, T, E2, o Pg estimularon la proliferación celular de IIB-MEL-J, IIB-MEL- LES e IIB-MEL-IAN mientras OH-Flu, casodex (Cas) o Tamoxifeno (Tam) la inhibieron significativamente. La acción inhibitoria del crecimiento celular ejercida por los antiandrógenos también se manifestó in vivo cuando se utilizó flutamida (Flu) en ratones atímicos portadores de tumores. Estos animales mostraron una disminución significativa del crecimiento tumoral y un marcado aumento de la sobrevida respecto de animales controles o sometidos a distintas terapias. Los resultados indican la existencia de RA en melanoma humano y un claro efecto protector por parte del antiandrógeno Flu.

Abstract:
Cutaneous malignant melanoma is becoming increasingly important in western countries due to its rising incidence, especially on the white population. A significant difference in survival between male and female patients has been reported, and the proportion of females cured was much greater than that of males. It has been theoretically proposed that an androgen dependency of melanoma could explain the longer survival time in women patients irrespective of the hormonal status of the female host. To evaluate the presence of androgen receptors in human melanoma cell lines, Scatchard analysis was performed in whole cells with -Rl881. IIB-MEL-J cells in culture revealed a single binding component with an apparent dissociation constant (KD) at 37°C of 11 nM and a binding capacity of 326 fmol/mg protein, 58,4 fmol/10(6) cells or 35.000 binding sites/cell. For IIB-MELLES cell, the KDobtained was 15 nM at 37°C, with a binding capacity of 280,6 fmol/mg total cell protein, 30,8 fmol/10(6) cells, or 18.500 binding sites/cell. IIB-MEL- IAN cells showed a KD of 14 nM at 37°C with a binding capacity of 206,4 fmol/mg total cell protein, 25,59 fmol/10(6) cells, or 15.400 binding sites/cell. Competition analysis revealed an atypical relaxation of specificity, since not only androgen testosterone (T), dihydrotestosterone (DHT), R188] and antiandrogcn hydroxy-flutamide (OH-Flu) competed for -R1881 binding, but also estradiol (E2), progesterone (Pg), and cortiso] (F) at 500-fold excess concentration. Immunocytochemistry of human melanoma cell lines IIB-MEL-J, IIB-MEL-LES and IIB-MEL-IAN was performed with monoclonal antibody anti-AR ANI-IS. Cells lines were deeply stained,'the intensity of the staining being high in the majority of specimen. When the same cells were tested with monoclonal antibodies raised against estrogen and progesterone receptors, no staining was found. All of the specimens of melanoma metastases that were tested for the presence of AR were deeply stained, the intensity of the staining being high in the majority of the specimens. Several hormones and antihormones were tested for their ability to stimulate cell proliferation on both cell lines with similar results. DHT, T, E2 or Pg stimulate significantly cell proliferation, this increase being reversed by OH-Flu, casodex (Cas) or tamoxifen (Tam). In addition, male and nude mice transplanted with IIB-MEL-J tumors were treated with flutamide (Flu) when tumors were palpable. Flu was effective in diminishing tumor growth and increasing survival rate of animals. As a conclusion, the presence of functional androgen receptors in these cells has been demonstrated by growth inhibition in vitro and in vivo with antiandrogens. In this study, we demonstrate a clear stimulation of cell proliferation by an androgen in human melanoma cell lines. The pure antiandrogen Flu showed an inhibitory effect on the cell growth in nude mice and a remarkable increase in survival rates of nude mice. Binding studies by Scatchard plot and competition studies showed the presence of androgen receptor with atypical sensitivity to different steroids. An interesting consequence of the present results is the possibility of clinical application of antiandrogen treatment to melanoma patients with androgen receptor.

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Registro:
Título : Influencia hormonal en el desarrollo del melanoma maligno humano     =    Hormonal influence on development of human malignant melanoma
Autor : Morvillo, Verónica
Director : Mordoh, José
Año : 1999
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Fundación Campomar. Instituto de Investigaciones Bioquímicas
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3245_Morvillo
Idioma : Español
Area Temática : 
Palabras claves : LINEA CELULAR DE MELANOMA; RECEPTOR ANDROGENICO; ANDROGENO; ANTIANDROGENO; FLUTAMIDA; RATONES ATIMICOS; MELANOMA CELL LINE; ANDROGEN RECEPTOR; ANDROGEN; ANTIANDROGEN; FLUTAMIDE; NUDE MICE
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