Tesis > Documento


Ver el documento (formato PDF)   Rosato Siri, Marcelo Damián.  "Estudio electrofisiológico y farmacológico de la transmisión sináptica en la unión neuromuscular de rata durante el desarrollo"  (2000)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
URL:
     
Resumen:
l. Se estudió el efecto de diferentes bloqueantes de canales de calcio (ω-Aga IVA, ω-CgTx GVIA, y dihidropiridinas) sobre la liberación evocada del neurotransmisor en las uniones neuromusculares (UNs) de embriones y de ratas recién nacidas. 2. El contenido cuántico (m) de la liberación evocada por estimulación nerviosa fue reducido casi completamente por el bloqueante de los canales de calcio dependientes de voltaje (CCDV) de tipo P/Q, la (ω-Aga IVA (100 nM) en las placas neuromusculares recientemente formadas de embriones y de ratas de 0-11 días de edad, en concordancia con el efecto de este bloqueante sobre la liberación del neurotransmisor en músculos adultos y reinervados. 3. La ω-CgTx GVIA (1-5 μM), el bloqueante de los CCDV de tipo N, también causó una reducción significativa en los valores de m, en una etapa temprana del desarrollo (embriones y animales de 0-4 días de edad) mientras que no fue efectiva en animales más adultos (ratas de 5-11 días de edad). 4. Los bloqueantes del canal de tipo L, nitrendipina (1 μM) y nifedipina (1 μM), no afectaron en forma significativa la liberación evocada neuralmente en las UNs en desarrollo. Sin embargo, la nifedipina (10 μM) incrementó significativamente los valores de m en las UNs de ratas de 0-4 días de edad. 5. En animales de 0-11 días de edad, la liberación evocada por alto K+ extracelular fue dependiente de la entrada de calcio a través de los CCDV de tipo P/Q (100 nM de la ω-Aga IVA redujo ~70% de la frecuencia de los potenciales de placa miniaturas evocados por alto K+). Los bloqueantes de los CCDV de tipo N y de tipo L no afectaron este tipo de liberación. 6. Los CCDV de tipo P/Q se encuentran más eficientemente acoplados a la liberación (pendiente promedio = 3.6 ± 0.09) que los canales de tipo N (pendiente promedio = 2.6 ± 0.03). 7. La incubación de los músculos con 10 μM de BAPTA-AM (un quelante de calcio rápido) desacopló a los canales de calcio de tipo N del proceso de liberación sin afectar a los canales de tipo P/Q. Esta diferencia podría ser explicada por una localización diferencial de estos canales dentro del mismo sitio de liberación en las UNs de ratas de 0-4 días de edad. 8 . En este estadio del desarrollo (i.e. 0-4 días de edad), la ω-CgTx GVIA (1 μM), la ω-Aga IVA (100 nM) y el BAPTA-AM (10 μM) redujeron significativamente la facilitación de la liberación generada por doble pulso en estos terminales motores. 9. Ninguna de las neurotrofinas estudiadas (NGF, GDNF, BDNF y NT-3) modificó la liberación espontánea ni la evocada por estimulación nerviosa cuando se estudió el efecto agudo de estos compuestos sobre la transmisión sináptica en esta preparación. 10. Se estudió también la modulación de la liberación del neurotransmisor por el agregado de diferentes bloqueantes de proteínas kinasas y de proteínas fosfatasas. 1 μM del ácido okadaico (OA) incrementó la liberación solo cuando el canal de tipo P/Q mediaba la transmisión sináptica. Por otro lado, el efecto de un activador de la PKC (i.e. TPA 2 μM) involucró tanto a los CCDV de tipo P/Q como a los de tipo N. 11 . Podemos concluir que en las uniones neuromusculares de ratas en desarrollo, los canales de calcio involucrados en la liberación: - son de tipo P/Q y de tipo N, - sufren cambios asociados al desarrollo en una etapa postnatal temprana, - muestran una eficiencia de liberación diferente posiblemente debido a una localización diferencial dentro del mismo sitio de liberación, - cumplen un papel importante en la generación de un fenómeno de plasticidad presináptica de corta duración, - y podrían estar modulados diferencialmente por vías intracelulares que involucren distintos tipos de segundos mensajeros.

Abstract:
1. The effects of different calcium channel blockers (ω-Aga IVA, ω-CgTx GVIA, and dihydropyridines) were tested on evoked transmitter release at embryonic and new-born rat neuromuscular junctions (NMJs). 2. The nerve-evoked transmitter release quantal content (m) was strongly reduced by the P/Q-type voltage-dependent calcium channel (VDCC) blocker ω-Aga IVA (100 nM) at newly formed endplates of embryos and 0-11 day-old rats, in agreement with the effect of this blocker on transmitter release at mature and reinnervating muscles. 2. ω-CgTx GVIA (1-5 μM), an N-type VDCC blocker, also caused a significant reduction on m at newly formed NMJs early in development (embryos and 0-4 day-old rats), while it was ineffective in maturer animals (5-11 day-old rats). 4. L-type channel blockers, nitrendipine (1 μM) and nifedipine (1 μM), did not significantly affect neurally evoked release at developing NMJs. However, nifedipine (10 μM) was able to increase m significantly at 0-4 day-old rat NMJs. 5. At developing NMJs (O-11 day-old rats), K+-evoked transmitter release was dependent on Ca2+ entry through VDCCs of the P/Q-type family (100 nM ω-Aga IVA reduced ~70% of the K+-evoked miniature endplate potential frequency). N- and L-type VDCC blockers did not affect this type of release. 6. The P/Q-type VDCCs are more efficiently coupled to neurotransmitter release (average slope = 3.6 ± 0.09) than N-type VDCCs (average slope = 2.6 ± 0.03). 7. The muscle incubation with BAPTA-AM 10 μM differentially affected the coupling of the N-type VDCCs to neurotransmitter release, without affecting the P/Q-type VDCCs. This difference could be accounted for by a differential location of these channels at the release sites of 0-4 day-old rat NMJs. 8. At this stage of development (i.e. 0-4 day-old), ω-CgTx GVIA 1 μM, ω-Aga IVA 100 nM and BAPTA-AM 10 μM significantly reduced the double-pulse facilitation of transmitter release in these motor nerve terminals. 9. NGF, GDNF, BDNF and NT-3 were not able to modify either spontaneous or nerve-evoked transmitter release, when we studied their acute effect on synaptic transmission in this preparation. 10. We also studied the modulation of neurotransmitter release by different protein-kinase and protein-phosphatase blockers. 1 μM okadaic acid (OA) was able to increase neurotransmitter release only if P/Q-type VDCCs mediated synaptic transmission, while the effect of a PKC activator (i.e. TPA 2 μM) involved both P/Q- and N-type of VDCCs. 11.We conclude that at neonatal rat neuromuscular junctions the presynaptic calcium channel types involved in transmitter release: - are P/Q- and N-type, - undergo developmental changes during the early postnatal period, - show a different efficacy in triggering transmitter release because they are differentially located at the same release site, - have an important role on a short-term form of presynaptic plasticity - and could be differentially modulated by different intracellular enzymatic pathways.

* A este resumen le pueden faltar caracteres especiales. Consulte la versión completa en el documento en formato PDF

Registro:
Título : Estudio electrofisiológico y farmacológico de la transmisión sináptica en la unión neuromuscular de rata durante el desarrollo     =    Electrophysiological and pharmacological study of synaptic transmission at the rat neuromuscular junction during development
Autor : Rosato Siri, Marcelo Damián
Director : Uchitel, Osvaldo Daniel
Año : 2000
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Departamento de Biología. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular
Facultad de Medicina. Instituto de Biología Celular y Neurociencias "Prof. Dr. Eduardo de Robertis"
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3277_RosatoSiri
Idioma : Español
Area Temática : 
Palabras claves : UNION NEUROMUSCULAR; LIBERACION DEL NEUROTRANSMISOR; CANALES DE CALCIO; DESARROLLO POSTNATAL; RATAS NEONATAS; OMEGA-CONOTOXINAS; OMEGA-AGATOXINAS; EFICIENCIA SINAPTICA; QUELANTES DE CALCIO; BAPTA-AM; EGTA-AM; FACILITACION POR DOBLE-PULSO; FACTORES NEUROTROFICOS; ACIDO OKADAICO; ESTERES DE FORBOL; NEUROMUSCULAR JUNCTION; TRANSMITTER RELEASE; CALCIUM CHANNELS; POSTNATAL DEVELOPMENT; NEONATAL RATS; OMEGA-CONOTOXINS; OMEGA-AGATOXINS; SYNAPTIC EFFICIENCY; CALCIUM BUFFERS; BAPTA-AM; EGTA-AM; DOUBLE-PULSE FACILITATION; NEUROTROPHIC FACTORS; OKADAIC ACID; PHORBOL ESTERS
URL al Documento : 
URL al Registro : 
hola chau _gs.DocumentHeader_ chau2 _documentheader_ chau3
Estadísticas:
     http://digital.bl.fcen.uba.ar
Biblioteca Central Dr. Luis Federico Leloir - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - Universidad de Buenos Aires
Intendente Güiraldes 2160 - Ciudad Universitaria - Pabellón II - C1428EGA - Tel. (54 11) 4789-9293 int 34