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Ver el documento (formato PDF)   Castilla Lozano, María del Rocío.  "Rol de la quinasa de proteínas dependiente de AMPc (PKA) en la diferenciación de Candida albicans : Existencia de una nueva isoenzima de PKA"  (2000)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
El objetivo principal de esta Tesis fue profundizar el estudio de los mecanismos bioquímicos involucrados en la transición dimórfica de Candida albicans. Este trabajo está basado en resultados previos de nuestro laboratorio en los que se había demostrado que la vía de señalización del AMPc está involucrada en la respuesta del hongo a algunos de los factores ambientales que controlan su morfología. En consecuencia, continuamos nuestra investigación enfocando el estudio en la participación de la enzima blanco del AMPc, la quinasa de proteína dependiente de AMPc (PKA), en Ia transición levadura —>micelio. Los resultados de los experimentos realizados in vivo con la cepa salvaje 1001 demostraron que: - La inhibición in vivo de la actividad de PKA utilizando inhibidores específicos resultó en un bloqueo completo de la transición dimórfica en medio mínimo cuando la inducción se llevó a cabo con NAcGlc. Cuando el inductor usado fue suero, la inhibición de la PKA no tuvo un efecto tan drástico. - La inhibición de la PKA no promovió efectos deletéreos en la célula ya que el agregado de suero pudo reiniciar la diferenciación en células bloqueadas ni produce efectos generalizados sobre el crecimiento ya que la gemación de las células levaduriformes no fue afectada. - La inhibición de la PKA resultó en un bloqueo generalizado de la fosforilación total de proteínas in vivo. EI agregado de dbAMPc al medio aumentó globalmente la fosforilación de proteínas y aún en su presencia la inhibición de la PKA promueve una desaparición completa de las proteínas fosforiladas. Estos experimentos permiten concluir que la PKA es un elemento crucial en la transducción de señales desencadenadas por NAcGlc y que su ubicación en la cascada de fosforilaciones es tal que controla otras quinasas, algunas de las cuales podrian estar involucradas en el dimorfismo. Los experimentos de germinación realizados con una mutante que carece del gen para la única subunidad catalítica (subunidad C) conocida hasta ese momento (gen TPK2), y los datos aportados por el Proyecto genoma de Candida , permitieron demostrar la existencia y expresión de un segundo gen para C no conocido. Es más, esta nueva C tiene también un rol positivo en la diferenciación. Demostramos también que la subunidad R es una fosfoproteína in vivo. La autofosforilación de la subunidad R resultó en una marcada disminución de su afinidad por C Io que hizo a la holoenzima mas sensible a disociación por AMPc. In vivo esta situación permitiría a la holoenzima ser disociada con pequeñas fluctuaciones de AMPc.

Abstract:
The main objective of this Thesis was to go deep into studies on the biochemical mechanisms involved in the dimorphic transition of Candida albicans. This work is based on previous results from our laboratory that demonstrated that the CAMP signaling pathway is involved the fungus response to some environmental factors which control its morphology. Consequently, to go on with our investigations we focussed our interest on the participation of the cAMP target enzyme, the cAMP-dependent protein kinase (PKA) on the yeast-to-hypha transition. The results of the in vivo experiments performed with the C. albicans wild type strain 1001, demonstrated that: - The inhibition of the PKA activity with specific inhibitors resulted in a complete blockade of the dimorphic transition in minima medium when the process was induced with GlcNAc. When the inducer was serum, the inhibition of PKA was not so drastic. - The inhibiton of PKA did not promote deleterious effects on the cells since the addition of serum allowed blocked cells to resume differentiation, nor produced generalized effects on growth since duplication of yeast cells was not affected. - The inhibition of PKA resulted in a generalized blockade of the total protein phosphorylation in vivo. The addition of dbcAMP to the medium raised protein phosphorylation as a whole, but even in its presence PKA inhibition promoted the disappearance of phosphorylated proteins. These experiments allow us to conclude that PKA is a crucial element in the signal transduction triggered by GlcNAc and that its location in the phosphorylation cascade is such that it control other kinases , some of which could be involved in dimorphism. Germination experiments performed using a mutant strain lacking the gene for the sole catalytic subunit (C) known up this moment (TPK2 gene), and data arising from the Candida genome Project, allowed us to demonstrate the existence of a second gene for C still unknown. What is more, this new C isoform also have a positive role on differentiation of C. albicans. We also found out that R subunit is a phosphoprotein in vivo. Autophosphorylation of R resulted in an important decrease in its affinity for C making the holoenzyme more sensitive to dissociation by cAMP. In vivo this situation could allow the holoenzyme to be dissociated by small fluctuations in cAMP levels.

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Registro:
Título : Rol de la quinasa de proteínas dependiente de AMPc (PKA) en la diferenciación de Candida albicans : Existencia de una nueva isoenzima de PKA    
Autor : Castilla Lozano, María del Rocío
Director : Cantore, María Leonor
Año : 2000
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Facultad de Agronomía
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3329_CastillaLozano
Idioma : Español
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