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Ver el documento (formato PDF)   García, Gabriela Andrea.  "Identificación y caracterización de proteínas en el Trypanosoma cruzi relacionadas con Glutatión - S - transferasas de otros organismos con el fin de definir blancos potenciales para el control de la transmisión de la infección"  (2001)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
Las drogas utilizadas para el tratamiento de la infección por T. cruzi, agente etiológico de la enfermedad de Chagas, presentan múltiples efectos colaterales y una eficacia variable en las etapas indeterminada y crónica de la infección. Por otro lado, no existe una vacuna para esta parasitosis que impida la transmisión y/o la enfermedad. Teniendo en cuenta la necesidad de la obtención de buenos inmunógenos y nuevas drogas tripanocidas más efectivas y seguras, el objetivo del Trabajo de Tesis fue definir nuevos posibles blancos para el control de la transmisión de la infección por T. cruzi a partir de la identificación de proteínas en este parásito relacionadas con glutatión-S-transferasas (GSTs)de otros organismos. la selección de las GSTs para dirigir esta búsqueda se basó en la participación de esta enzima, cuyos genes aun no fueron identificados en T. cruzi, en un metabolismo divergente entre el parásito y su hospedero mamífero y en una respuesta inmune protectiva contra la infección experimental por este parásito. En la primera parte del trabajo, que se denominó Parte A, se planteó la identificación de secuencias de genes funcionales resultantes del Proyecto Genoma de T. cruzi con homología con GSTs y su posterior caracterización a fin de determinar si su producto puede postularse como posible blanco de quimioterapia. Como resultado de esta búsqueda se identificó un nuevo gen de copia única, denominado TCGRX,cuyo producto presentó el patrón aminoacídico completo de glutarredoxinas (ers) y similitud con ers y GSl‘sde diversos organismos pero no con enzimas de mamíferos. El modelado molecular de una porción de la TCGRX sobre la Grx 3 de Escherichia coli sugiere que esta proteína tendría la estructura típica de ambas familias. En la segunda parte del trabajo, (Parte B),teniendo en cuenta la existencia en T. cruzi de antígenos de reactividad cruzada con la GST de 26 kDa de Schistosoma japonicum (GSTsj) y que las GSTs son enzimas muy conservadas en su estructura tridimensional se planteó la identificación de estos antígenos utilizando como herramienta un suero anti-GSTsj y su posterior caracterización y evaluación en protocolos de inmunoprotección. Por cromatografía de inmunoafinidad con el suero anti-GSTsj se purificó una fracción a partir de epimatlgotes de T. cruzi, denominada PHGST, que presentó actividad de GST.Por otro lado, el rastreo de una biblioteca genómica de T. cruzi con este antisuero dio como resultado la selección de 38 clones que codificaron para antígenos de la familia Tc13 de la superfamilia de antígenos de superficie de tripomastigotes. la identificación de un miembro de esta familia en la cepa Tulahuén del parásito, denominado PHGST#5, permitió su comparación con los ya conocidos en cuanto a su estructura aminoacídica. Mediante la hibridación de cromosomas separados y transferidos a membranas, se determinó que los genes Tc13 se localizan principalmente en el cromosoma III y su homólogo. Las funciones inmunomoduladoras descriptas para ciertas proteínas de la superfamilia de antígenos de superficie y su participación en el desarrollo de una respuesta inmune protectiva, sustentó la evaluación del antígeno PHGST#5 en experimentos de inmunoprotección en ratones de la cepa BALB/c. La inmunización plasmídica con PHGSTT#5 no indujo una respuesta humoral específica y la respuesta celular, evaluada por efecto de hipersensibilidad retardada (DTH) frente a la inoculación con el antígeno recombinante, fue muy leve; mientras que, la inmunización con la proteína recombinante MBP-PHGST#5 indujo tanto una respuesta humoral como celular, evaluada por DTH. La inmunización plasmídica de PHGST#5, así como la inmunización con MPB-PHGST#5 produjeron una disminución significativa de la parasitemia luego del desafío con formas infectantes del parásito. La inmunización plasmídica con PHGST#5,además disminuyó el daño y el parasitismo tisular luego del desafío. Por lo tanto, la selección de las GSTs para dirigir la definición de nuevos posibles blancos para el control de la transmisión de la infección por T. cruzi permitió identificar el gen TCGRX,cuyo producto por no poseer contraparte en el mamífero, luego de la caracterización bioquímica podría postularse como posible blanco para el diseño de drogas tripanocidas e identificar el antígeno PHGST#5, un nuevo miembro de la familia Tc13 con posibles epitopes compartidos con la GSTsj, y definir su efecto inmunoprotector tanto de la infección y como de la patología chagásica.

Abstract:
Trypanosoma cruzi is the ethiological agent of Chagas’disease. Drugs that have been utilized so far in the treatment of T. cruzi infection have shown colateral effects. No vaccine does exist against this parasitosis. The objective of this thesis has been to define new possible targets for the control of the transmission of T. cruzi infection by means of the identification of parasite proteins related to Glutathion-S-Trasferases (GST)of other organisms. The selection of the GSTs to direct this screening was based on the participation of this enzyme in a divergent metabolism between the parasite and the mammal host and in a protective immune response against the experimental infection with the parasite. These genes have not been identified in T.cruzi yet. The identification of functional T. cruzi gene sequences which showed GST homology resulted from the T. cruzi Genome Project and allowed to identify a unique (single) gene copy TcGRX.The product of this gene showed homology to glutaredoxin (ers) and GSTs from different organisms, but no homology was found to enzymes from mammals. This characteristics support biochemical studies of TcGRX with the purpose of postulating a new possible target for the design of trypanocidal drugs. The utilization of an anti-GST of Schistosoma japonicum serum as a tool for the identification of cross reacting antigens in T. cruzi allowed the purification of an epimastigote fraction, which showed GST activity. The purification of this fraction was performed by immunoaffinity chromatography. The a-GSTsj serum was used to screen a T. cruzi genomic library and allowed the finding of a new member of the Tc13 family. This family belongs to the denominated PHGST#5 superfamily of trypomastigote surface antigens. This antigen showed an immunoprotective effect against the infection as well as the chagasic pathology, and was evaluated by means of both plasmid and recombinant protein immunization.

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Registro:
Título : Identificación y caracterización de proteínas en el Trypanosoma cruzi relacionadas con Glutatión - S - transferasas de otros organismos con el fin de definir blancos potenciales para el control de la transmisión de la infección     =    Identification and chacterization of Trypanosoma cruzi proteins related to Glutation-S- Transferase of other organisms. Potential targets for the control of infection transmission
Autor : García, Gabriela Andrea
Director : Ruiz, Andrés Mariano
Año : 2001
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben"
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3346_Garcia
Idioma : Español
Area Temática : Biología / Parasitología
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