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Ver el documento (formato PDF)   Perez Castro, Carolina Inés.  "Rol de la familia de citoquinas gp130 en la regulación de la función hipofisaria"  (2002)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
Las cítoquinas mas conocidas en la regulación de la función de células de la pituitaria anterior son LIF e IL-6. Estas cítoquinas, junto con IL-11, oncostatina M, CNTF y cardiotrofma-1, son referidas como cítoquinas gp 130, debido a que comparten el mismo transductor de señales. En la presente tesis, se estudió el papel de las cítoquinas de la familia gp130 en células de la pitutaria anterior. Se encontró que, tanto células TtT (foliculoestrlladas-FS) como GH3 (lactosomatotrofas) expresan el mRNA para la cadena específica α del receptor de IL-11 (IL-11-R) y de CNTF-R. Ambas cítoquinas estimulan la proliferación de células FS y células GH3. También, CNTF estimula la producción hormonal (GH y PRL) en células GH3 e IL-11 la secreción de VEGF en células FS. Ambos tipos celulares expresan el mRNA para CNTF. Células normales de pituitaria anterior y adenomas humanos también expresan CNTF-R(α).IL-11 y CNTF estimulan en forma similar los niveles del mRNA GH en cultivos celulares acromegálicos en monocapa, sin modificar los niveles de secreción hormonal. CNTF estimula la secreción de PRL en monocapa de prolactinomas. En cultivos en monocapa de células normales, IL-11 y CNTF no modifican la secreción de GH y PRL, ni los niveles del mRNA GH. Sin embargo, cuando las células son cultivadas en forma de agregados celulares, ambas cítoquinas estimulan la secreción de dichas hormonas. Se estudió además la acción de esta familia de cítoquinas sobre los procesos tumorigénicos. En clones estables de células GH3 que sobreexpresan gp130 (gp130 sentido), y clones de expresión reducida (gp130 antisentido), se examinó la secreción hormonal, la proliferación celular y la capacidad tumorigénica de los clones en ratones nude. La sobreexpresión de gp130 no modificó el comportamiento celular. Sin embargo, los clones gp130 antisentido, que no responden al estímulo específico de la citoquina gp130, mostraron una marcada inhibición in vitro y en el desarrollo de tumores in vivo. Mediante la técnica de Differential Display se aisló e identificó un cDNA (X2CR1) el cual se expresa diferencialmente en células que sobreexpresan gp130. Este cDNA codifica para una proteina de 195-aa; no posee motivos funcionales conocidos y posee una localización citoplasmática/nuclear. Su perfil de expresión (mRNA) correlaciona con el de gp130. Presenta una secuencia altamente conservada (entre rata y humano), y dos isoformas (mRNA) en los distintos tejidos analizados. La sobreexpresión de X2CR1, regula negativamente tanto la expresión basal del promotor de GH, así como la estimulación con cAMP. De estos resultados se puede concluir: - las cítoquinas gp130 y sus receptores, se expresan y son funcionales en células normales como tumorales de la pituitaria anterior. IL-11 y CNTF son capaces de regular, a través del transductor común gp130, la secreción de hormonas y factores angiogénicos, así como la proliferación celular. La estructura de la glándula es de crítica importancia para la acción de estas cítoquinas; - la sobreexpresión de gp130 en células GH3 no modifica rotundamente el comportamiento celular. Sin embargo, la disminución en los niveles de expresión, refleja la importancia de la acción de las cítoquinas de esta familia no sólo en situaciones fisiológicas sino patofisiológicas como en la formación y/o el mantenimiento de adenomas hipofisarios; - células lactosomatotrofas sobreexpresoras de gp130, expresan diferencialmente X2CR1. Esta nueva proteína podría tener un papel como regulador negativo de las acciones de gp130 así como de otras rutas de señalización intracelular (como en la de CAMP).

Abstract:
Two of the most potent cytokines regulating anterior pituitary cell function are LIF and IL-6. These and others like IL-11, oncostatín M, CNTF and cardiotropin- 1 are referred to as the gp130 cytokines, because they share the gp130 protein as an initial signal transducer. In the present thesis of work, we studied the role of the gpl30 cytokine family in anterior pituitary cells. Receptors (mRNA α-chain specific) for IL-11 and CNTF are expressed on both lactosomatotropic (GH3 cells) and folliculostellate-FS cells (TtT cells). Both cytokines stimulate the proliferation of FS and GH3 cells. In addition, CNTF stimulates the hormonal production (GH and PRL) by GH3 cells and IL-11 stimulates the secretion of VEGF, by FS cells. Both GH3 and FS cells express the CNTF mRNA. The mRNA for the CNTF-R is expressed in all of the human adenoma types analyzed and normal pituitary cells. CNTF and IL-11 exerted a similar stimulatory effect on GH mRNA expression in acromegalic monolayers cell cultures, but these cytokines had no significant influence on GH secretion. CNTF stimulates prolactine secretion in prolactinoma monolayers cell cultures. In monolayers cell cultures from normal rat anterior pituitary, IL-11 and CNTF had no significant effect on the release of either GH or PRL, or on the level of GH mRNA. However, when these cells were cultured in aggregate cultures, both cytokines stimulated hormonal secretion. We generated GH3 gp130 stable clones (gp130 sense and gp130 antisense), in order to study the role of gp130 cytokine family in the tumorigenic process. We examined hormonal secretion, cell growth and tumorigenesis properties in athymic nude mice. The overexpressed gp130 clones did not shown any changes in the cellular behavior. The gp130 antisense clones did not respond to the specific gp130. Likewise, GH3 gp130 antisense cells had severely impaired the in vivo tumor development. By Differential Display technique, we isolated and identified a new cDNA (X2CR1), which differentially expressed in overexpressed gp130 cells. This cDNA encodes a protein of 195-aa, which contains no well-characterized functional motifs and shows a citoplasmic/nuclear localization. Its expression profile (mRNA) is linked with the gp130 expression. The rat X2CRl shares striking sequence homology with its human counterpart, and in the human tissues that we analyzed it presents two different isoforms. GH promoter baseline activity and also under CAMP stimulation were reduced by overexpression of X2CR1. From these results the following conclusions can be drawn: - the gp130 cytokines and their receptors are expressed and are functional in normal anterior pituitary cells and pituitary tumor cells. CNTF and IL-11 regulate, through gp130 transducer, the secretion of hormone, VEGF and the cell proliferation. The three-dimensional structure of the gland is critical for these actions; - the overexpressed gp130 protein did not produce any changes in the GH3 cellular behavior. In contrast, the reduction gp130 level, revealed the importance of the gp130 cytokines actions not only in physiological but also in patophysiological situations, like the beginning and/or the maintenance of pituitary adenoma development; - X2CR1, a novel protein isolated from overexpressed gp130 GH3 cells, may function as a negative regulator of the gp130 cytokines actions, and also may play a similar role in another intracellular pathways (like cAMP signaling).

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Registro:
Título : Rol de la familia de citoquinas gp130 en la regulación de la función hipofisaria    
Autor : Perez Castro, Carolina Inés
Director : Arzt, Eduardo
Año : 2002
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Departamento de Fisiología y Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3436_PerezCastro
Idioma : Español
Area Temática : Biología / Biología Molecular y Celular
Biología / Endocrinología
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