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Ver el documento (formato PDF)   Kobayashi, Ken.  "Análisis de la interacción planta-virus mediante la caracterización molecular de plantas transgénicas que expresan proteínas de movilización de PVX"  (2002)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
Durante la primera etapa del presente trabajo, se transformaron Nicotiana tabacum con el gen ORF3 que codifica la proteina p12 de PVX,con el fin de estudiar los efectos que provoca la expresión de esta proteina viral en la interacción planta-virus. A pesar de que las plantas transgénicas mostraron un aspecto normal, observaciones hechas con el microscopio revelaron la presencia de alteraciones en sus hojas. Al infectar estas plantas con PVX,se observó en sus hojas la aparición de sintomas atípicos y el desarrollo de resistencia al virus. Los sintomas consistlan en la formación de anillos amarillos concéntricos rodeados de tejido necrosado. Además, los mismos eran acompañados de cambios bioquímicos asociados a la respuesta hipersensible (HR), y no se formaban en plantas transgénicas sanas ni en plantas no transgénicas infectadas con PVX.No se observó una resistencia similar cuando las plantas p12 se inocularon con TMV o PVY. lo que sugirió la existencia de un mecanismo de resistencia específica contra PVX.A pesar de la aparición de sintomas de tipo HR, no se observó la inducción de una respuesta SAR en plantas p12 infectadas con PVX. Tampoco, se encontraron evidencias que indiquen la presencia de resistencia mediada por RNA. Durante la segunda etapa del trabajo, se analizaron plantas transgénicas previamente transformadas con el gen ORF2 que codifica la protelna p24 de PVX. con el fin de estudiar las alteraciones fisiológicas provocadas por la expresión de la misma. Estas plantas mostraron una apariencia clorótica y un marcado enanismo. A pesar de poseer hojas más pequeñas. distancias intemodales más cortas y reducción del tamaño en todos sus órganos, las plantas p24 poseían una relación de los tamaños tallo/raíz normal. Además, el tamaño de meristema radicular resultó más pequeño que el de las plantas control. Otros análisis revelaron que la tasa fotosíntética estaba disminuida en las plantas p24 y que los niveles de almidón, tanto en las hojas como en las raices, se encontraban reducidos. Además, las hojas mostraron un alto contenido de nitrato y una considerable acumulación de transcriptos de proteinas PR. Varias lineas de evidencia sugieren que el fenotipo enano de las plantas p24 serla una consecuencia directa de la actividad de la proteina p24, y no un efecto indirecto de la disminución de la fotosíntesis o de los cambios metabólicos.

Abstract:
In the first part of the present work, Nicotiana tabacum were transformed with the PVX ORF3 gene coding for the p12 protein, with the aim of studying the effects provoked by its overexpression. Although the transgenic plants exhibited a normal morphological aspect, microscopic examination revealed extensive alterations in leaf tissue structure. After challenging with PVX, the transgenic plants showed resistance to PVX infection and formation of leaf symptoms consisting of concentric rings encircled by necrotic borders. These novel symptoms were accompanied by biochemical changes normally associated with the Hypersensitive Response (HR) and were absent in non-infected transgenic plants or in PVX-infected non-transgenic plants. No equivalent virus resistance was observed after inoculation with TMV or PVY, suggesting the presence of a specific resistance mechanism in p12 plants. Despite the development of HR-like symptoms, SAR was not induced in PVX-infected p12 transgenic plants. No evidence of an RNA-mediated resistance mechanism was found. During the second part of this work, transgenic N. tabacum plants previously transformed with the PVX ORF2 gene coding the p24 movement protein were further analyzed with the aim of studying the physiological alterations provoked by viral MP. These plants exhibit a slightly chlorotic appearance and a pronounced stunted phenotype. Although p24 plants have smaller leaves, shorter internodes and reduced organs, their shoot to root ratio remained similar to that of control plants. Moreover, root meristems were smaller in p24 plants than in control plants. Further analyses of transgenic plants showed considerable reductions in photosynthetic rates and lower starch levels in both leaves and roots. In addition, p24 leaves showed higher nitrate levels and a significant accumulation of PRs transcripts. Different lines of evidence suggest that the stunted phenotype observed in p24 plants is a direct consequence of p24 activity and not an indirect effect derived from diminished photosynthesis or other metabolic changes.

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Registro:
Título : Análisis de la interacción planta-virus mediante la caracterización molecular de plantas transgénicas que expresan proteínas de movilización de PVX    
Autor : Kobayashi, Ken
Director : Mentaberry, Alejandro N.
Año : 2002
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular (INGEBI)
Departamento de Ciencias Biológicas (DB)
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3437_Kobayashi
Idioma : Español
Area Temática : Biología / Fitopatología
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