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Ver el documento (formato PDF)   Jancic, Carolina Cristina.  "Células dendríticas humanas : caracterización de su interacción con proteínas de matriz extracelular y de su capacidad inmunoreguladora"  (2002)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
Las células dendríticas (DC) son las más eficientes células presentadoras de antígenos y cumplen un rol central en la inducción de la respuesta inmune primaria. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la interacción de las DC con otros tipos celulares y con la matriz extracelular (MEC); los factores que modulan dicha interacción; y la capacidad de las DC para inducir la proliferación de células T. Para ello se utilizaron DC obtenidas a partir de monocitos de sangre periférica (moDC) empleando interleuquina (IL) 4 y el factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF), en presencia de suero humano (SH) o suero bovino fetal (SBF). Las moDC fueron capaces de adherirse a células endoteliales obtenidas a partir de vena de cordón umbilical humano (HUVEC) y a distintas proteínas de MEC. Esta adhesión fue modulada por citoquinas como el TNFα y la IL1β. Mientras que el tratamiento de las células endoteliales con TNFα indujo una mayor adhesión y migración de moDC, el tratamiento de las moDC con dicha citoquina provocó una disminución en la adhesión tanto a endotelio como a fibronectina (FN) y laminina (LM), pero no a colágeno tipo IV (Col tipo IV). Los efectos de esta citoquina fueron mediados por el receptor de tipo 11, cuya expresión disminuyó cuando las células se trataron con TNFα. La interacción de las moDC con HUVEC no activado fue parcialmente mediada por CD18, C029, CD49e y CD31. Por otro lado, la adhesión a proteínas de MEC fue mediada por las integrinas CD49e (para FN), CD49c y CD49f (para LM). La expresión de estas moléculas no se modificó con el tratamiento de las moDC con TNFα. Sin embargo, la activación de las integrinas con PMA revirtió el efecto inhibitoriodel TNFα sobre la adhesión a FN. Además de disminuir la adhesión a proteínas de MEC, el tratamiento de las moDC con TNFα e IL1β disminuyó el contenido intracelular de AMPc. Las células no adherentes a FN presentaron menores niveles de AMPc, mayor expresión de IL12 y mejor capacidad estimuladora de linfocitos T, comparadas con las células adherentes. En estas moDC el aumento del contenido de AMPc utilizando un inhibidor de la fosfodiesterasa o análogos de AMPc, revirtió el efecto del TNFα sobre la adhesión a FN y sobre su capacidad inmunoestimuladora. Por otro lado, estímulos “no clásicos” como el aumento de la osmolaridad extracelular modifican ciertas propiedades de las moDC, disminuyendo su capacidad endocítica. su adhesión a proteínas de MEC y su habilidad para inducir la proliferación de linfocitos T alogeneicos. El tratamiento hiperosmolar, además, provocó una disminución en el contenido de IL12, sin modificar la expresión de las moléculas HLA-I, HLA-DR, CD18, CD54 y CD86. Las moDC generadas bajo diferentes condiciones de cultivo presentaron características particulares. Las células cultivadas en presencia de SBF (moDC-SBF) expresaron CD80 en la superficie celular a diferencia de las células cultivadas en presencia de SH (moDC-SH). Estas últimas presentaron reservorios intracelulares de dicha molécula. Además, las moDC-SBF mostraron una mayor expresión de IL12 y una alta eficiencia para inducir la proliferación de células T durante una respuesta inmune antígeno específica, comparadas con las moDC-SH. Los resultados obtenidos en el presente trabajo sugieren que el TNFα actuaría sólo sobre la población de moDC que expresa el RTNF tipo II, posiblemente inactivando las integrinas que participan en la interacción con las proteínas de MEC, lo que resulta en una menor adhesión. Además, existiría una correlación entre el contenido de AMPc y los cambios inducidos por el TNFα en las moDC, tanto en la adhesión a FN como en su capacidad inmunoestimuladora. Por otro lado, el aumento en la osmolaridad extracelular podría generar moDC con baja habilidad para estimular la proliferaciónde células T, lo cual podría estar en parte debido a la menor producción de IL12 y la menor capacidad para incorporar antígenos bajo condiciones hiperosmolares. Finalmente, la expresión de CD80 podría depender de factores presentes en el suero utilizado durante el cultivo de las moDC. Resumen

Abstract:
Dendritic cells (DC) are professional antigens presenting cells that play a critical role in the induction of acquired immune responses. The aim of the present study was to analyze the cell-DC and extracellular matrix (ECM) proteins-DC interactions. The factors that modulate this interactions and the immunostimulatory capacity of DC were further examined. Monocytes derived DC (moDC) were used for these experiments. MoDC were able to adhere to endothelial cells obtained from human umbilical vein (HUVEC) and to ECM proteins. This adhesion was modulated by cytokines such as TNFα and IL1β. TNFa treated HUVEC increased moDC adhesion and migration. In contrast, TNFα treated moDC were less adherent to endothelium, fibronectin (FN) and laminin (LM), but not to collagen type IV (Col type IV). TNFα effect was mediated through TNF receptor II, which was downmodulated on TNFα-treated moDC. The moDC-HUVEC interaction was partially mediated by CD18, CD29, CD49e and CD31. The moDC adhesion to ECM proteins was mediated by CD49e for FN, and CD49c and CD49f for LM. The expression of these molecules did not change on TNFα treated moDC. However, PMA reversed the inhibitory effect of TNFα on FN adhesion, probably by integrin inactivation. TNFα also decreased the cAMP levels on moDC. Indeed, TNFα treated cells non-adhered to FN showed lower levels of cAMP, higher IL12 expression and better immunostimulatory capacity compared with FN adhered moDC. By increasing the cAMP content with a phosphodiesterase inhibitor (IBMX) or cAMP analogues (8Br-cAMP) was possible to reverse the TNFα effect on adhesion and T-cell stimulatory capacity. Alternatively, moDC incubated with high extracellular osmolarity detached from ECM proteins and showed lower immunostimulatory capacity, compared with cells in iso-osmolar conditions. The effect of hiperosmolarity could be mediated by IL12, since those treated moDC showed lower level of IL12 without changes in the expression of surface molecules. Some features of moDC were modified depending on the culture conditions. Cells cultured in the presence of fetal bovine serum (FBS) (moDC-FBS) expressed CD80 while CD80ˉ moDC were generated by using human serum (HS) (moDC-HS). However, the moDC-HS showed intracellular expression of this molecule. Other differences observed between these two moDC were the higher IL12 production and the capacity to stimulate antigen-specific T cells of moDC-FBS, compared with moDC-HS. Overall, these results suggest that TNFα and other non-classical stimuli act on some moDC decreasing the adhesion, probably by modulating the activation state of integrins. Furthermore, cAMP levels correlate with TNFα-induced changes of moDC adhesion and allostimulatory capacity. Finally, expression of CD80 on cellular membrane may depend on different factors present in serum, being FBS able to generate CD80+ moDC with better immunostimulatory capacity.

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Registro:
Título : Células dendríticas humanas : caracterización de su interacción con proteínas de matriz extracelular y de su capacidad inmunoreguladora    
Autor : Jancic, Carolina Cristina
Director : Chuluyan, Eduardo
Año : 2002
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas "José de San Martín". Laboratorio de Inmunogenética
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3473_Jancic
Idioma : Español
Area Temática : Biología / Inmunología
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