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Ver el documento (formato PDF)   Kovalovsky, Damián.  "Inducción y activación de Nurr77 y Nurr1 por CRH e IL-1 en corticotrofos : rol sobre la regulación del gen de POMC y vías de transducción de señales involucradas"  (2002)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
En este trabajo de tesis abordamos el estudio de la función corticotrofa normal y tumoral focalizándonos en tres temas fundamentales: a) los eventos moleculares involucrados en la regulación de los factores de transcripción Nur y sus consecuencias en la activación del gen de proopiomelanocortina (POMC) por la hormona liberadora de corticotrofina (CRH) y AMP cíclico (cAMP), b) la implicancia de los factores Nur en la regulación corticotrofa por interleuquina-1 (IL-1) y c) la de interacción entre IL-1,CRH y glucocorticoides. Demostramos en células corticotrofas AtT20 que la entrada por canales de calcio tipo L es esencial para la inducción de los mRNAs de Nur77 y Nurr1 y la estimulación de la actividad Nur por CRH a través de la actividad de CAMKII. La entrada de calcio es suficiente para producir la estimulación. El tratamiento con cAMP estimula Nur77 también independientemente del calcio entrante. Existe una vía de MAPK (Rap1/B-Raf/MEK1,2/ERK1,2) funcional en corticotrofos que estimula la fosforilación y actividad transcripcional de Nur77 y que es activada por CRH y cAMP en forma calcio-dependiente y calcio-independiente. La regulación por estas vías de señalización sobre la actividad Nur correlaciona con la regulación sobre el promotor de POMC. Demostramos también que Nur77 media la acción estimulatoria de IL-1 sobre el promotor de POMC: IL-1 estimula la actividad Nur sobre el sitio NurRE; produce la inducción del mRNA de Nur77 y no de Nurr1, un efecto transcripcional a nivel del promotor de Nur77; estos efectos dependen de la actividad de la protein quinasa p38; una línea que sobreexpresa una mutante dominante negativa de Nur77 es insensible a la estimulación por lL-1 de la secreción de ACTH, la actividad Nur y la inducción de POMC. La activación del factor de transcripción NFkB ejerce un efecto negativo en la estimulación de la actividad Nur y la inducción de POMC por IL-1. Demostramos que la potenciación entre IL-1 y CRH sobre la secreción de ACTH se observa también sobre la actividad Nur. El tratamiento con IL-1 aumenta la sensibilidad a la inhibición de la secreción de ACTH por glucocorticoides, tanto en la línea celular AtT20 como en cultivos primarios de adenomas corticotrofos humanos. Este efecto no es consecuencia de la inhibición del mRNA de POMC sino un efecto a nivel de la secreción y no es consecuencia de una diferencia en la afinidad de GR por los glucocorticoides ni una diferencia en el número de GR. En conclusión, en este trabajo de tesis caracterizamos por primera vez las vías de señalización involucradas en la regulación de la actividad Nur y la función corticotrofa por IL-1, CRH, glucocorticoides y sus interacciones, demostrando que la regulación de la expresión de POMC y ACTH en corticotrofos involucra: la existencia de una vía de MAPK funcional, la actividad fundamental de Nur tanto para CRH como para IL-1 y la interacción funcional de IL-1 con CRH (sinergismo) y con glucocorticoides (aumento de la sensibilidad a la inhibición).

Abstract:
In this thesis work we studied the normal and tumoral corticotrophic function focusing on three fundamental points: a) the molecular events involved in Nur regulation and its consequences on proopiomelanocortin (POMC) gene regulation by corticotrophic releasing hormone (CRH), cyclic AMP (cAMP), b) the implicance of Nur factors in corticotrophic regulation by interleukin-1 (IL-1) and c) the interaction among IL-1, CRH and glucocorticoids. We demonstrate that calcium entry through L type channels is crucial for Nur77 and Nurr1 mRNA induction and increased activity by CRH treatment involving CAMKII function. Calcium entry is sufficient to produce this stimulation. Treatment with cAMP stimulates Nur77 also independently of calcium. There is a functional MAPK (Rap1/B-Raf/MEK1,2/ERK1,2) pathway in corticotrophs that stimulates Nur77 phosphorylation and transcriptional activity and it is activated by CRH and cAMP treatments involving calcium-dependent and —independent signals. POMC regulation by this pathways correlates with Nur activity. We also demonstrate that Nur77 is involved in the stimulation of POMC by IL-1: IL-1 stimulates Nur activity on the NurRE site; induces Nur77 and not Nurr1 mRNAs, a transcriptional effect on the Nur77 promoter; these effects depend on p38 protein kinase activity; a cell line that overexpresses a dominant negative mutant of Nur77 is insensitive to IL-1 stimulation of ACTH secretion, Nur activity and POMC induction. NFkB activity exerts a negative effect on Nur activity and POMC mRNA induction by IL-1. We demonstrate that the synergism between CRH and IL-1 on ACTH secretion is also observed on Nur activity. IL-1 treatment increases the inhibitory effect of glucocorticoids on ACTH secretion, in the corticotrophic AtT20 cell line and in corticotroph human adenomas primary cultures. This effect is not a consequence of inhibition of POMC mRNA but an effect at the level of secretion and it is not due to different affinity of glucocorticoid receptor (GR) for glucocorticoids nor to different GR number. In conclusion, in this thesis work we characterized for the first time the signaling pathways involved in the regulation of Nur activity and the corticotrophic function by IL-1,CRH, glucocorticoids and its interactions, demostrating that the regulation of POMC mRNA expression and ACTH in corticotrophs involves: the existence of a functional MAPK pathway, the instrumental activity of Nur for CRH and IL-1 actions and the functional interaction of IL-1 with CRH (synergism) and with glucocorticoids (increased sensitivity to inhibition).

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Registro:
Título : Inducción y activación de Nurr77 y Nurr1 por CRH e IL-1 en corticotrofos : rol sobre la regulación del gen de POMC y vías de transducción de señales involucradas    
Autor : Kovalovsky, Damián
Director : Arzt, Eduardo
Año : 2002
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Departamento de Fisiología y Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3476_Kovalovsky
Idioma : Español
Area Temática : Biología / Biología Molecular y Celular
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