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Ver el documento (formato PDF)   Gamberale, Romina.  "Regulación de la sobrevida de los linfocitos B de Leucemia Linfática Crónica : papel de los receptores para el fragmento Fc de la IgG"  (2002)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
La leucemia linfática crónica de células B (LLC-B) se caracteriza por la progresiva acumulación de linfocitos B clonales, que presentan muy baja tasa proliferativa y resistencia a morir por apoptosis. El objetivo de este trabajo de Tesis fue investigar el papel que cumplen los leucocitos no-malignos como posibles reguladores de la apoptosis de las células leucémicas. Por otro lado, considerando que las células LLC-B expresan receptores para el fragmento Fc de la IgG (RFCγ)y que es frecuente la presencia de complejos inmunes (Cl) en el suero de los pacientes, se analizó el papel de los RFcγ en la modulación de la sobrevida de las células leucémicas. Los resultados obtenidos demuestran que los monocitos y las células NK son capaces de prolongar la sobrevida de las células leucémicas en cultivo a través de distintos factores, tanto solubles como de contacto celular. Para tratar de identificar la producción de alguno de ellos se realizaron cultivos en presencia de anticuerpos neutralizantes anti-IFNγ,anti-IL-4 y anti-IL-10, encontrándose una marcada heterogeneidad entre los distintos pacientes evaluados. La misma variabilidad de respuesta se obtuvo al bloquear la interacción de CD40 con su ligando mediante anticuerpos anti-CD40. En conjunto, estos resultados sugieren que la capacidad de los monocitos y las células NK de favorecer la sobrevida de las células leucémicas depende de una sumatoria de señales que parecen ser particulares de cada paciente. Cuando los cultivos de células LLC-B y leucocitos accesorios se llevaron a cabo en presencia de Cl fue posible no sólo inhibir la apoptosis espontánea sino también la inducida agentes quimioterápicos como la fludarabina, el clorambucilo y la dexametasona. Es decir, que la activación de monocitos y células NK por entrecruzamiento de sus RFCγ estaría favoreciendo la acumulación del clon leucémico. Teniendo en cuenta que las células LLC-B sobre expresan la proteína antiapoptótica Bcl-2 y que la expresión de la misma se inhibe a medida que progresa la apoptosis ¡n vitro, se examinaron los niveles de Bcl-2 en las células leucémicas cultivadas con o sin leucocitos accesorios. Los resultados indican que la presencia de monocitos y células NK retarda la down-regulación de Bol-2 en las células leucémicas. Por el contrario, cuando la inhibición de la apoptosis de las células LLC-B se da a consecuencia de la activación de los leucocitos accesorios por Cl , el bol-2 no parece estar involucrado. La última parte de esta Tesis comprende el estudio de la expresión y funcionalidad de los RFcγ expresados por las leucémicas. Los datos presentados demuestran que las células B-CLL expresan no sólo el RFcγIIb característico de las linfocitos B normales, sino también la isoforma RFcγIIa. Debido a que portan dominios ITAM en su porción citoplasmática. los RFCγIIa transducen señales de activación. Sin embargo, ni la utilización de distintos tipos de Cl, ni el entrecruzamiento selectivo de los RFCγIIa logró inducir la activación de las células LLC-B, medida como cambios en los flujos de calcio. Tampoco fue posible modular la apoptosis en las Leucémicas purificadas, Lo que sugiere que este receptor no seria funcional en LLC-B.

Abstract:
B cell chronic lymphocytic leukemia (B-CLL) is characterized by the progressive accumulation of clonal B lymphocytes caused by defects in programmed cell death rather than increased proliferation. The aim of the current Thesis was to investigate the role of non-malignant leucocytes in the regulation of B-CLLcells apoptosis. On the other hand, considering that leukemic cells express receptors for the Fc fragment of IgG (FCγR) and the presence of immune complexes (IC) is frequently found in B-CLL patients, we analized whether IC could modulate leukemic cells survival. Our results show that monocytes and NK cells were able to prolong the survival of cultured leukemic cells through different factors, not only soluble factors, but also cell-cell interactions. In an attempt to determine which are the factors involved in the protective effect mediated by accessory leukocytes, we performed cultures in the presence of neutralizing antibodies (Ab) directed to IL-4, IFNγ or IL-10, as well as blocking Ab to CD40. We found a marked heterogeneity among different patients, suggesting that the mechanisms involved in the regulation of apotosis might differ among B-CLL samples. In addition, it is conceivable that an array of factors rather than a single factor may account for the protective effect exerted by monocytes and NK cells. The anti-apoptotic effect was also observed when B-CLL cells and non-malignant Ieukocytes were cultured in the presence of immune complexes (IC). In this case, IC were able to inhibit,not only spontaneous apoptosis, but also the one induced by different chemotherapeutic agents, like fludarabine, chIorambuciI or dexamethasone. Thus, the activation of monocytes and NK cells by their FcγR crosslinking, may favor the accumulation of the leukemic clone. Taking into account that B-CLL cells over express the anti-apoptotic protein Bcl-2 and its expression was inhibited in vitro during the culture, we analized the expression of Bcl-2 in leukemic cells cultured with or without accessory leukocytes. Our results showed that the presence of monocytes and NK cells delays Bcl-2 down-regulation. However, when the cultures were done with IC, Bcl-2 seems not to be involved in the protective effect exerted by accessory cells. The last part of the current Thesis involves the study of the expression and functionality of FCyRexpressed by leukemic cells. We here present that B-CLL cells express no only FcγRIIb,found on normal B cells, but also FcγRIIa. which have ITAM domains related to activating signals. Surprisingly, neither the IC interaction with FeyRs on B-CLL cells, nor the FCγRIIa crosslinking with specific Ab, could modulate leukemic cells apoptosis or activation, measured by calcium mobilization. Our results suggest that FcγRIIa expressed on B-CLL cells may not be functional.

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Registro:
Título : Regulación de la sobrevida de los linfocitos B de Leucemia Linfática Crónica : papel de los receptores para el fragmento Fc de la IgG    
Autor : Gamberale, Romina
Director : Giordano, Mirta
Director Asistente : Geffner, Jorge R.
Año : 2002
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Academia Nacional de Medicina. Instituto de Investigaciones Hematológicas. Sección Inmunología
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3503_Gamberale
Idioma : Español
Area Temática : Biología / Biomedicina
Biología / Inmunología
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