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Ver el documento (formato PDF)   Raíces, Marcela.  "Identificación y caracterización de quinasas y fosfatasas de proteínas inducidas durante la tuberización de Solanum tuberosum"  (2003)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
En este trabajo se estudiaron genes posiblemente involucrados en los procesos de señalización relacionados con la tuberización. Se identificaron los genes StCDPK1, StCDPK2 y StCDPK3, que son los primeros miembros de la familia CDPK de Solanum tuberosum. En particular se caracterizó el gen StCDPK1 que codifica para una quinasa activa con todas las propiedades de las CDPKs. Se demostró que StCDPK1 se miristoíla in vitro y que su localización subcelular depende de miristoilación y palmitoilación. Por otra parte se determinó que existe una fuerte correlación entre la expresión de StCDPK1 y el engrosamiento del estolón. Mediante ensayos de hibridación in situ se observó que StCDPK1 se expresa en el ápice de estolones inducidos a tuberizar. También se determinó que StCDPK3 se expresa diferencialmente en estolones tempranos. En ensayos de Western blot se identificaron dos CDPKs, de 55 y 60 kDa, cuya expresión correlaciona con la expresión de los genes StCDPK3 y StCDPK1 respectivamente. Se determinó que la actividad CDPK asociada a estolones tempranos y la actividad CDPK asociada a estolones inducidos poseen diferente especificidad de sustrato y distinta localización subcelular. Por otra parte se estudió el efecto de la sacarosa sobre la tuberización y sobre la expresión de StCDPK1. Se determinó la importancia de las actividades quinasa durante la inducción de la tuberización inducida por sacarosa y se demostró que este azúcar induce la expresión de StCDPK1 mediante un mecanismo que involucra la actividad de fosfatasas de la familia PP1/PP2A. Además, se identificó el gen StPP2A1c que codifica para la primer fosfatasa de la familia PP2A de Solanum tuberosum. Se determinó que el gen StPP2A1c se expresa diferencialmente durante la tuberización y, mediante ensayos de complementación en levaduras, se demostró que este gen codifica para una fosfatasa funcional.

Abstract:
In this work we studied genes which are possiby involved in the signalling events leading to tuber development. The first members of Solanum tuberosum CDPK family, StCDPK1, StCDPK2 y StCDPK3, were identified. The gene StCDPK1, which encodes an active kinase with all the features of CDPKs, was characterized. It was demonstrated that StCDPK1 suffers myristoylation in vitro and that its subcellular localization depends on myristoylation and palmitoylation. On the other hand, a strong correlation between StCDPK1 expression and stolon swelling was established. Using in situ hybridization we observed that StCDPK1 is expressed in the apical dome of tuberizing stolons. Moreover, StCDPK3 is differentially expressed in early stolons. By Western blot assays, two CDPKs of 55 y 60 kDa which correlated with the expression of StCDPK3 y StCDPK1 respectively, were detected. The CDPK activity associated to early and induced stolons showed different substrate specificity and subcellular localization. The effect of sucrose on tuberization and StCDPK1 expression was also analyzed. The importance of protein kinase activities during sucrose-induced tuber development was established and the induction of StCDPK1 by sucrose, through a mechanism that involves PP1/PP2A phosphatase activities,was demonstrated. Besides, we identified StPP2A1c, a gene that encodes the first phosphatase of the PP2A family in Solanum tuberosum. StPP2A1c was differentially expressed during tuberization and encoded a functional phosphatase, as was observed in yeast complementation assays.

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Registro:
Título : Identificación y caracterización de quinasas y fosfatasas de proteínas inducidas durante la tuberización de Solanum tuberosum     =    Identification and characterization of protein kinase and phosphatases that are induced during tuberization in Solanum tuberosum
Autor : Raíces, Marcela
Director : Téllez-Iñón, María Teresa
Año : 2003
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular (INGEBI)
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3549_Raices
Idioma : Español
Area Temática : Biología / Fisiología Vegetal
Biología / Biología Molecular y Celular
Palabras claves : TUBERIZACION; SOLANUM TUBEROSUM; QUINASA DE PROTEINAS DEPENDIENTE DE CALCIO (CDPK); MIRISTOILACION; PALMITOILACION; FOSFORILACION; SACAROSA; FOSFATASA PP2A; TUBERIZATION; SOLANUM TUBEROSUM; CALCIUM-DEPENDENT PROTEIN KINASE(CDPK); MYRISTOYLATION; PALMITOYLATION; PHOSPHORYLATION; SUCROSE; PP2A PHOSPHATASE
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