Tesis > Documento


Ver el documento (formato PDF)   Manrique, Mariana Lorena.  "Rol de la proteína matriz (MA) del virus de inmunodeficiencia de felinos (FIV) en el ensamblado viral : relación funcional entre la MA de FIV y la de los lentivirus de primates"  (2004)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
URL:
     
Resumen:
El virus de inmunodeficiencia de felinos (FIV) es un lentivirus que causa en gatos domésticos un síndrome de inmunodeficiencia similar al SIDA de humanos. Por ello, el sistema FIV-gato doméstico es considerado un modelo adecuado para el estudio de las infecciones producidas por el virus de inmunodeficiencia de humanos (HIV). El gen gag de FIV, al igual que el del resto de los lentivirus, codifica para el precursor poliproteico Gag el cual se ensambla en partículas virales en la membrana plasmática de la célula infectada. Gag es procesado por la proteasa viral en las proteínas maduras de la cápside: matriz (MA), cápside y nucleocápside. Sin embargo, se desconocía hasta el momento la contribución de cada uno de los dominios de Gag de FIV al ensamblado viral. Con el objeto de estudiar el proceso de ensamblado de FIV, utilizamos el sistema del virus vaccinia para producir la formación de partículas a través de la expresión del gen gag. Los estudios bioquímicos y de microscopía electrónica realizados con células infectadas con este virus vaccinia recombinante demostraron que la poliproteína Gag de FIV se autoensambla en partículas con morfología lentiviral que son liberadas al medio extracelular. Para estudiar el rol de la proteína MA de FIV en la morfogénesis viral, se construyeron virus vaccinia recombinantes lleando mutaciones en este dominio del gen gag de FIV. La caracterización del fenotipo de estas proteínas Gag mutadas llevó a la identificación de dominios en la MA de FIV necesaios para el transporte de Gag a la membrana plasmática y para el ensamblado de partículas virales. Por otra parte, se decidió estudiar la relación estructural y funcional que existe entre la proteína MA de FIV y la del virus de inmunodeficiencia de simios (SIV), caracterizando el fenotipo de ensamblado de virus quiméricos derivados de SIV o FIV, en los que se reemplazó total o parcialmente el dominio MA de un virus por el del otro. El reemplazo total de la MA de SIV por su equivalente de FIV (quimera SIV) interfiere con el ensamblado de Gag en viriones. La poliproteína quimérica Gag SIV(MA FIV1-130) no se asocia eficientemente a membranas a pesar de miristilarse en igual nivel que el precursor Gag de SIV. El defecto en el ensamblado de la proteína Gag SIV(MA FIV1-130) es revertido por mutaciones que incrementan el carácter básico de la MA de FIV (mutación G31K/G33K) o por la coexpresión con el precursor Gag salvaje de SIV. Esto último indica que la proteína Gag quimérica mantiene la capacidad de establecer interacciones Gag-Gag. Por otro lado, las proteínas Gag quiméricas SIV(MA FIV1-36) y SIV(MA FIV37-130) en las que se sustituyó parcialmente el dominio MA de SIV por la región equivalente de FIV, se ensamblan en viriones con la misma eficiencia que el precursor Gag salvaje de SIV. Sin embargo, estos viriones son incapaces de incorporar la glicoproteína viral de envoltura y resultan significativamente menos infecciosos que el virus SIV salvaje. Finalmente, se construyó el virus quimérico FIV(MA SIV1-130) que contiene la MA de SIV en reemplazo de la de FIV. Este virus quimérico no sólo se ensambla eficientemente en viriones, sino que además es capaz de replicarse en una línea celular linfoidea felina. Los resultados obtenidos en este trabajo de tesis contribuyen así a comprender la homología funcional que existe entre las proteínas MA de lentivirus evolutivamente distantes.

Abstract:
Feline immunodeficiency virus (FIV) is a lentivirus that induces in cats an immunodeficiency syndrome similar to AIDS caused by human immunodeficiency viruses (HIVs) in humans. These similarities make the feline-FIV system a useful model for the study o HIV-1 infections. The FIV gag gene, like that of other lentiviruses, codes for the polyprotein precursor Gag that assembles into particles at the plasma membrane of infected cells. Gag is processed by the viral protease into the matrix (MA), capsid and nucleocapsid proteins which from the mature virions. However, the contribution of each of the FIV Gag domains to virus assembly had not as yet been addressed. To study the assembly process of FIV, we made use of the vaccinia virus system to reproduce particle formation by expressing the FIV gag gene. The biochemical and electron microscopy studies performed with cells infected with this recombinant vaccinia virus demonstrated that the FIV Gag polyprotein self-assembles into typical lentiviral particles that are released into the extracellular medium. To study the role of the FIV MA protein in virus morphogenesis, we generated a series of recombinant vaccinia viruses carrying mutations within the MA domain of the FIV gag gene. Phenotypic characterization of these FIV Gag mutants led to the identification of MA domains that are necessary for Gag transport to the plasma membrane and for particle production. Moreover, we investigated the structural and functional relationship between the FIV MA protein and that of the primate lentivirus simian immunodeficiency virus (SIV) by analyzing the assembly phenotype of SIV- and FIV-derived chimeric viruses in which the MA-coding region was partially or fully swapped. The replacement of the SIV MA domain with that of FIV (chimera SIV) severely impairs Gag assembly into virions. The chimeric Gag SIV (MA FIV1-130) polyprotein exhibits low membrane-binding capacity despite being myristylated in a wild-type manner. The assembly defect of the chimeric Gag SIV(MA FIV1-130) is reversed either by mutations that increase the basic character of the FIV MA (mutation G31K/G33K) or by coexpression with the wild-type Gag precursor; which indicates that the chimeric Gag protein retains the ability to participate in Gag-Gag interactions. Furthermore, the chimeric Gag polyproteins SIV(MA FIV1-36) and SIV(MA FIV37-130), in which SIV MA regions were replaced by their equivalent counterpart of the FIV MA, assemble into virions as efficiently as wild-type SIV Gag. However, these chimeric viruses do not incorporate the viral envelope glycoprotein and are significantly less infectious than wild-type SIV virions. Finally, we constructed the chimeric FIV(MV SIV1-130) virus containing the SIV MA-coding region in the context of the FIV genome. This chimeric virus not only assembles into virions with an efficiency similar to that of FIV, but is able to replicate in a feline lymphoid cell line as well. The results presented in this thesis thus provide further insight into the functional homology between MA proteins from distantly related lentiviruses.

* A este resumen le pueden faltar caracteres especiales. Consulte la versión completa en el documento en formato PDF

Registro:
Título : Rol de la proteína matriz (MA) del virus de inmunodeficiencia de felinos (FIV) en el ensamblado viral : relación funcional entre la MA de FIV y la de los lentivirus de primates    
Autor : Manrique, Mariana Lorena
Director : Affranchino, José Luis
Año : 2004
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Centro de Virología Animal (CEVAN)
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Químicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3696_Manrique
Idioma : Español
Area Temática : Biología / Virología
Palabras claves : VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA DE FELINOS; VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA DE SIMIOS; PROTEINA MATRIZ; PROTEINA GAG; ENSAMBLADO VIRAL; FELINE INMUNODEFICIENCY VIRUS; SIMIAN INMUNODEFICIENCY VIRUS; MATRIX PROTEIN; GAG PROTEIN; VIRAL ASSEMBLY
URL al Documento : 
URL al Registro : 
hola chau _gs.DocumentHeader_ chau2 _documentheader_ chau3
Estadísticas:
     http://digital.bl.fcen.uba.ar
Biblioteca Central Dr. Luis Federico Leloir - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - Universidad de Buenos Aires
Intendente Güiraldes 2160 - Ciudad Universitaria - Pabellón II - C1428EGA - Tel. (54 11) 4789-9293 int 34