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Ver el documento (formato PDF)   Chimeno Zoth, Silvina Andrea.  "Estudio antigénico e inmunogénico de tres proteínas aisladas del virus de la diarrea viral bovina (BVDV): su aplicación al diagnóstico y al desarrollo de vacunas experimentales"  (2004)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
El virus de la diarrea viral bovina (BVDV)es el agente etiológico de una importante enfermedad que afecta al ganado ocasionando grandes pérdidas económicas a nivel mundial. La infección por BVDV es a menudo subclínica o causa sintomatología clínica leve y poco específica, sin embargo, la infección transplacentaria puede ocasionar desórdenes reproductivos, malformaciones congénitas y nacimiento de animales persistentemente infectados (PI). La vacuna empleada actualmente en Argentina se formula con virus inactivado químicamente. Sin embargo, los datos existentes sobre su efectividad para inducir anticuerpos neutralizantes son contradictorios y la protección frente a la infección no resulta plenamente satisfactoria. En nuestro país, la prevalencia de anticuerpos anti BVDV en el ganado bovino es de 40-90%, según los reportes; aproximadamente el 2% de la población total de animales se encuentra persistentemente infectado. En esta compleja situación epidemiológica, la técnica de referencia utilizada para la detección de anticuerpos anti BVDV es la seroneutralización en cultivo celular. Si bien esta técnica resulta muy especifica y sensible, requiere de un laboratorio de diagnóstico de mediana-alta complejidad y resulta económicamente desventajosa para analizar un número alto de muestras. En el presente trabajo se abordaron ambas problemáticas centrales para el control de la enfermedad. Por un lado, se desarrollaron y evaluaron ensayos de ELISA para detectar anticuerpos anti BVDV en el suero de los bovinos. Los ensayos se diseñaron utilizando cada una de las tres proteínas más inmunogénicas del virus, E0, E2 y NS3, expresadas en el sistema baculovirus / células de insecto. Los ensayos de ELISA demostraron ser altamente sensibles y específicos en la detección de anticuerpos anti BVDV, de manera similar a la neutralización. Más aún, la inclusión de la proteína no estructural NS3 permitió detectar anticuerpos anti BVDV en animales tipificados como negativos en ensayos de seroneutralización. Por otro lado, se ensayó una vacuna experimental basada en la glicoproteína E2. Para ello se llevó a cabo una prueba de vacunación y desafío en la que se evaluó la respuesta inmune humoral y la protección conferida por la vacuna experimental frente a una de las vacunas comerciales usada actualmente. El nivel de anticuerpos neutralizantes presentes en el suero de los animales vacunados con la vacuna recombinante E2 fue significativamente mayor que el inducido por la vacuna inactivada convencional. Al momento del desafío, los animales vacunados con E2 presentaron altos niveles de anticuerpos neutralizantes, mientras que en los animales de los grupos vacunados con vacuna inactivada o con placebo, éstos fueron indectables. Coincidentemente, la sintomatología clínica desarrollada por los bovinos vacunados con la vacuna E2 recombinantes después del desafío viral fue más leve. Los resultados obtenidos demuestran que es posible mejorar las actuales vacunas contra BVDV, así como diseñar nuevos ensayos diagnósticos sencillos, sensibles, específicos y económicos basados en la utilizaciónde las proteínas recombinantes E2 y E2/E0/NS3, respectivamente. Este trabajo puede considerarse como un primer paso hacia la resolución de ambos problemas.

Abstract:
Bovine viral diarrhea virus (BVDV)is the ethiological agent of an important disease that affects cattle producing elevated economic Iosses worlwide. Usually, BVDV infection is subclinical or causes mild disease. However, transplacental infection may result in reproductive desorders, teratogenic effects or persistent infection in the neonatal calf (PI animals). Vaccines used nowadays in Argentina are based on chemically inactivated virus, however, existent data on their effectivity as neutralizing antibodies inducers are contradictory and protection against viral infection is not entirely satisfactory. In our country, prevalence of anti-BVDV antibodies of 40-90% has been reported, and near the 2% of the cattle population is considered persistently infected. In the context of this complex epidemiological situation, the reference technique employed for the detection of anti BVDVantibodies is the seroneutralization assay in cell culture. This technique is very specific and sensible, but it requires a middle-high complex laboratory equipment and results economically unproductive when a high number of samples must be processed. In the present work, both central concerns for the disease control were considered. On one hand, ELISA assays for anti-BVDV antibodies detection in cattle sera were developed and evaluated. Assays were designed using the most immunogenic proteins of BVDV, EO, E2 and NS3 expressed in the baculovirus / insect cells system. ELISA assays showed to be highly sensible and specific for anti-BVDV antibodies detection. Moreover, the inclusion of non structural protein NS3 made possible the detection of specific antibodies in animals classified as negative by seroneutralization assays. On the other hand, a recombinant subunit vaccine based on E2 glycoprotein was tested. Humoral immune response and protection conferred in cattle vaccinated with the experimental vaccine or a commercialy available vaccine were evaluated. The level of neutralizing antibodies in sera of animals vaccinated with the recombinant E2 vaccine was significantly higher than the one induced by the conventional vaccine. At challenge, animals experimentally vaccinated showed high levels of neutrallizing antibodies whereas animals vaccinated with the inactivated vaccine or the negative control group showed undetectable neutrallizing antibody levels. The results obtained showed that it is possible to improve current used BVDV vaccines and to design better diagnostic assays based on the use of recombinants E2 and E2/E0/NS3 proteins respectively. This work may be considered as a first step towards the resolution of both problems.

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Registro:
Título : Estudio antigénico e inmunogénico de tres proteínas aisladas del virus de la diarrea viral bovina (BVDV): su aplicación al diagnóstico y al desarrollo de vacunas experimentales     =    Antigenic and immunogenic analysis of three proteins from bovine viral diarrhea virus (BVDV): application on diagnosis and development of experimental vaccines
Autor : Chimeno Zoth, Silvina Andrea
Director : Piccone, María Elisa
Director Asistente : Taboga, Oscar A.
Año : 2004
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA) Castelar. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas (CICVyA). Instituto de Biotecnología
Grado obtenido : Doctor en Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3739_ChimenoZoth
Idioma : Español
Area Temática : Biología / Virología
Palabras claves : VIRUS DE LA DIARREA VIRAL BOVINA; BACULOVIRUS; CELULAS DE INSECTO; ANTIGENOS RECOMBINANTES; ELISA; VACUNAS RECOMBINANTES; ANTICUERPOS NEUTRALIZANTES; BOVINE VIRAL DIARRHEA VIRUS; BACULOVIRUS; INSECT CELLS; RECOMBINANT ANTIGENS; ELISA; RECOMBINANT VACCINES; NEUTRALIZING ANTIBODIES
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