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Ver el documento (formato PDF)   Proietti, Cecilia Jazmín.  "Cross-talks entre las vías de señalización del transductor de la señal y activador de la transcripción 3 (Stat3) y el receptor de progesterona en células de cáncer de mama"  (2006)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
Se han descripto interacciones entre las vías de los receptores de hormonas esteroideas y de las proteínas transductoras de señales y activadoras de la transcripción (Stats). En este trabajo, se exploró la capacidad de los progestágenos de modular la activación transcripcional de Stat3 en un modelo experimental de carcinogénesis hormonal en donde el progestágeno sintético acetato de medroxiprogesterona (MPA) indujo adenocarcinomas mamarios en ratones hembras de la cepa BALB/c y en la línea celular de cáncer de mama humano, T47D. Se encontró que las células epiteliales C4HD, del modelo tumoral C4HD inducido por MPA, expresan Stat3 y que el tratamiento de las células C4HD con MPA aumenta la expresión de la proteína Stat3. Además, el MPA induce un efecto no genómico, rápido de fosforilación en tirosina de Stat3, Jak1 y Jak2 en las células C4HD y en las T47D. El tratamiento con MPA de las células C4HD también resultó en una rápida fosforilación en tirosina de c-Src. Estos efectos fueron completamente inhibidos por el antagonista de progestágenos RU486. El bloqueo de las actividades de Jak1 y Jak2 mediante la transfección transiente de las células C4HD con vectores dominantes negativos (DN) para Jak1 o Jak2, o la inhibición de la actividad de c-Src con el inhibidor selectivo de quinasas de la familia Src, PP2, bloqueó la capacidad del MPA de inducir la fosforilación de Stat3. El tratamiento de las células C4HD con MPA indujo la unión de Stat3 al ADN. También, el MPA promovió una fuerte activación transcripcional de Stat3 en las células C4HD y en las T47D, la cual fue inhibida por RU486 y por el bloqueo de las actividades de Jak1, Jak2 y Src. Para investigar la correlación entre la activación de Stat3 inducida por MPA y el crecimiento celular, las células C4HD fueron transfectadas con un vector de expresión para una forma DN de Stat3, Stat3Y705-F, o con un mutante de Stat3 constitutivamente activo, Stat3-C. Mientras que la expresión del mutante Stat3Y705-F ejerció un efecto inhibitorio en el crecimiento celular inducido por MPA de las células C4HD, la transfección con el vector de Stat3 constitutivamente activo, provocó proliferación independiente del MPA. Finalmente, se investigó el efecto de bloquear la activación de Stat3 en el crecimiento in vivo de los tumores mamarios C4HD. La inhibición de la activación de Stat3 mediante la transfección de las células C4HD con el vector de expresión para DN Stat3Y705-F, inhibió significativamente la habilidad de estas células de formar tumores en ratones singeneicos. Estos resultados demuestran por primera vez, que los progestágenos son capaces de inducir la activación transcripcional de Stat3, la cual es un requisito obligatorio para la estimulación del crecimiento inducido por MPA de las células tumorales mamarias, tanto in vivo como in vitro.

Abstract:
Interactions between steroid hormone receptors and signal transducers and activators of transcription (Stats)-mediated signaling pathways have already been described. In the present study, we explored the capacity of progestins to modulate Stat3 transcriptional activation in an experimental model of hormonal carcinogenesis in which the synthetic progestin medroxyprogesterone acetate (MPA) induced mammary adenocarcinomas in female Balb/c mice, and in the human breast cancer cell line T47D. We found that C4HD epithelial cells, from the MPA-induced mammary tumor model, expressed Stat3 and that MPA treatment of C4HD cells up-regulated Stat3 protein expression. In addition, MPA induced rapid, nongenomic, Stat3, Jak1, and Jak2 tyrosine phosphorylation in C4HD and T47D cells. MPA treatment of C4HD cells also resulted in rapid c-Src tyrosine phosphorylation. These effects were completely abolished by the progestin antagonist RU486. Abrogation of Jak1 and Jak2 activity by transient transfection of C4HD cells with dominant negative (DN) Jak1 or DN Jak2 vectors, or inhibition of Src activity by preincubation of cells with the Src family kinase inhibitor PP2, blocked MPA capacity to induce Stat3 phosphorylation. Treatment of C4HD cells with MPA induced Stat3 binding to DNA. In addition, MPA promoted strong Stat3 transcriptional activation in C4HD and T47D cells, which was inhibited by RU486 and by blockage of Jak1, Jak2 and Src activities. To investigate the correlation between MPA-induced Stat3 activation and cell growth, C4HD cells were transiently transfected with a DN Stat3 expression vector, Stat3Y705-F, or with a constitutively activated Stat3 mutant, Stat3-C. While expression of Stat3Y705-F mutant had an inhibitory effect on MPA-induced growth of C4HD cells, transfection with the constitutively activated Stat3-C vector resulted in MPA-independent proliferation. Finally, we addressed the effect of targeting Stat3 in in vivo growth of C4HD breast tumors. Blockage of Stat3 activation by transfection of C4HD cells with the DN Stat3Y705-F expression vector significantly inhibited these cells’ ability to form tumors in syngeneic mice. Our results have for the first time demonstrated that progestins are able to induce Stat3 transcriptional activation, which is in turn an obligatory requirement for progestin stimulation of both in vitro and in vivo breast cancer growth.

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Registro:
Título : Cross-talks entre las vías de señalización del transductor de la señal y activador de la transcripción 3 (Stat3) y el receptor de progesterona en células de cáncer de mama     =    Cross-talks between signal transducer and activator of transcription 3 (Stat3) and progesterone receptor signaling pathways in breast cancer cells
Autor : Proietti, Cecilia Jazmín
Director : Elizalde, Patricia V.
Jurados : Bal de Kier Joffe, E.  ; Cánepa, E.  ; Arzt, E.
Año : 2006
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Instituto de Biología y Medicina Experimental(IBYME)CONICET
Grado obtenido : Doctor de la Universidad de Buenos Aires en Ciencias Químicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3997_Proietti
Idioma : Español
Area Temática : Química / Química Biológica
Palabras claves : CANCER DE MAMA; RECEPTOR DE PROGESTERONA; STAT3; JAKS; SRC; INHIBICION DEL CRECIMIENTO IN VIVO; BREAST CANCER; PROGESTERONE RECEPTOR; IN VIVO TARGETING
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