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Ver el documento (formato PDF)   Ferrer, María Florencia.  "Construcción y evaluación de virus MVA recombinantes que expresan la glicoproteína D del virus BoHV-1"  (2010)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
El virus vaccinia Ankara modificado (MVA) es un virus altamente atenuado que se utiliza eficientemente como vector viral no replicativo para el desarrollo de nuevas vacunas. En este trabajo de Tesis se desarrolló un nuevo inmunógeno basado en MVA que expresa como antígeno de interés la glicoproteína D (versión secretada, gDs) del virus herpes bovino tipo I (BoHV-1), un agente infeccioso ampliamente distribuido en Argentina. Primeramente, se diseñó y construyó el vector de transferencia para obtener MVA recombinantes utilizando como sitio blanco de inserción el gen no esencial MVA086R. Se obtuvieron virus MVA-gDs recombinantes y se demostró la correcta expresión, antigenicidad y N-glicosilación de la glicoproteína D expresada a partir de dichos virus. Posteriormente, se evaluó la capacidad inmunogénica de los virus MVA-gDs en animales de experimentación (ratones y conejos). En el modelo de ratón, se observó que los virus MVA-gDs desencadenaron una respuesta inmune específica, de tipo humoral, que se mantuvo en niveles similares durante un período de siete meses (luego de la aplicación de dos dosis del inmunógeno). Además, se demostró que la síntesis de novo de la glicoproteína D a partir del vector viral no replicativo MVA-gDs fue la responsable de la respuesta inmune específica. La inoculación de conejos con virus MVA-gDs (por vía intramuscular o subcutánea) desencadenó una respuesta inmune específica de tipo humoral, observándose la máxima respuesta a los 9 días post dosis de refuerzo. En un ensayo de desafío de conejos con el virus BoHV-1, se observó que la inmunización por vía intramuscular de los animales con virus MVA-gDs disminuyó la excreción del virus de desafío. Finalmente, se demostró que la inmunización de ratones por vía intranasal con virus MVA-gDs adicionados con toxina colérica indujo respuestas inmunes humorales específicas de tipo IgA en muestras de lavados nasales y broncopulmonares y de tipo IgG en muestras de suero. De esta forma, se obtuvo, caracterizó y evaluó un nuevo inmunógeno denominado MVA- gDs que, en el futuro, podría ser evaluado como candidato a vacuna contra el virus BoHV-1 en bovinos.

Abstract:
Modified vaccinia virus Ankara (MVA) is a highly attenuated virus. During the past years, non-replicative recombinant MVA vectors have gained major interest in the development of new veterinary vaccines. Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) infection is widely distributed in Argentina and there are no efficacious vaccines to prevent the diseases caused by this virus. In order to develop a candidate vaccine for BoHV-1, the secreted version of glycoprotein D (gDs) was selected as the antigen to be expressed in new recombinant MVA non-replicative based vectors. First, the design and construction of the transference vector necessary to obtain recombinant MVA viruses was achieved using the non-essential gene MVA086R. Recombinant MVA-gDs virus was obtained and molecularly characterized, confirming the correct expression, antigenicity and N-glycosilation of glycoprotein D. Then, immunogenicity of recombinant MVA-gDs viruses was assessed in experimental animals (mice and rabbits). Mice immunized with MVA-gDs viruses developed a specific humoral immune response that was maintained for seven months and was dependent on the booster dose. In addition, mice immunized with MVA-gDs virus demonstrated that MVA-gDs non-replicative viral vector was responsible for the de novo synthesis of glycoprotein D and, consequently, for the immune response induced in animals immunized with not inactivated MVA-gDs virus. Intramuscular and subcutaneous rabbit inoculation with MVA-gDs virus was immunogenic and induced a specific humoral immune response. In a rabbit BoHV-1 challenge assay, diminished viral excretion was observed in those animals intramuscularly immunized with recombinant MVA-gDs. Finally, in order to evaluate MVA-gDs virus as a mucosal vaccine, two doses of MVA-gDs supplemented with cholera toxin were delivered by intranasal immunization of mice. These immunizations induced anti-gD IgA humoral immune responses in nasal and bronchopulmonar lavages as well as anti-gD IgG antibodies in serum samples. In conclusion, the new immunogen designated MVA-gDs was developed, characterized and evaluated in experimental animals. In the future, it could be evaluated in cattle as a candidate bovine vaccine for BoHV-1.

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Registro:
Título : Construcción y evaluación de virus MVA recombinantes que expresan la glicoproteína D del virus BoHV-1     =    Development and evaluation of recombinant MVA viruses expressing bohv-1 glycoprotein D
Autor : Ferrer, María Florencia
Director : Calamante, Gabriela
Consejero : Hopp, Horacio Esteban
Jurados : Pérez Filgueira, D.  ; Campos, R.  ; Scolaro, L.
Año : 2010
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Instituto de Biotecnología, CICVyA, INTA Castelar
Grado obtenido : Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_4690_Ferrer
Idioma : Español
Area Temática : Biología / Virología
Biología / Inmunología
Palabras claves : MVA RECOMBINANTES; GLICOPROTEINA D; INMUNOGENO RECOMBINANTE; VIRUS BOHV-1; INMUNIDAD EN MUCOSAS; RECOMBINANT MVA; GLYCOPROTEIN D; RECOMBINANT IMMUNOGEN; BOHV-1 VIRUS; MUCOSAL IMMUNITY
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