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Ver el documento (formato PDF)   Losino, Noelia Ivana.  "Las células madre pluripotentes son propagadas en un medio de cultivo novedoso que preserva sus propiedades fundamentales y aumenta su proliferación, asociada a la presencia de una isoforma de fibronectina que incluye el exón EDA"  (2013-03-19)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
Las células madre (CM) pluripotentes, entre ellas, las CM embrionarias (CME) y CM pluripotentes inducidas (CMPI) son capaces de propagarse indefinidamente en cultivo y de diferenciarse a todos los tipos celulares del organismo. Encontramos un medio de cultivo que permite su propagación, preservando sus propiedades básicas, evaluadas por análisis de expresión de marcadores y diferenciación in vitro e in vivo; y aumentando paralelamente su proliferación. Este medio es condicionado por una línea celular de granulosa bovina, mitogénico sobre otros tipos celulares, adjudicándose dicho efecto a la fibronectina (FN) que incluye el exón EDA (FN+EDA). En este contexto, decidimos analizar si esta isoforma de FN aumenta la proliferación de las CME. Estudiamos los niveles de proliferación de las CME en presencia de EDA exógeno, mediante dos estrategias. Utilizamos medios condicionados por líneas de fibroblastos embrionarios de ratón genéticamente modificadas, que secretan sólo FN+EDA, FN sin EDA o ambas isoformas. Por otra parte, evaluamos el efecto de un péptido correspondiente a una porción de FN que incluye o no dicho exón. En todos los casos, observamos que la presencia de este dominio produjo un aumento en la proliferación en CME de ratón y humanas, evaluada por MTT, cristal violeta y ensayos de sanado de herida. Esperamos que nuestros hallazgos contribuyan al conocimiento de los mecanismos moleculares involucrados en la proliferación de CM y a la optimización de sus condiciones de cultivo.

Abstract:
Pluripotent stem cells, which include Embryonic Stem Cells (ESC) and induced Pluripotent Stem Cells (iPSC) can be propagated indefinitely in culture and are able to differentiate into all cell types of the organism. We found a culture medium that allows their propagation, preserving their basic properties, evaluated by analysis of marker gene expression and in vitro and in vivo differentiation protocols. This medium also increased pluripotent stem cell's proliferation. This is a medium conditioned by a bovine granulosa cell line, previously reported to be mitogenic for other cell types, ascribing this effect to fibronectin (FN) containing EDA exon (FN+EDA). In this context, we decided to study if this FN isoform increases the proliferative rate of ESC. We studied the mitogenic effect on ESCs in the presence of exogenous EDA, by two strategies. We used conditioned media from genetically modified lines of mouse embryonic fibroblasts that secrete only FN+EDA, FN without EDA or both isoforms. Furthermore, we evaluated the effect of a peptide corresponding to a portion of FN comprising or not EDA exon. In all cases, we observed that the presence of this domain resulted in an increase in the proliferation rate of both mouse and human ESC, assessed by MTT, crystal violet, and wound healing assays. We hope that our findings contribute to the understanding of the molecular mechanisms involved in the proliferation of pluripotent stem cells and optimization of culture conditions.

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Registro:
Título : Las células madre pluripotentes son propagadas en un medio de cultivo novedoso que preserva sus propiedades fundamentales y aumenta su proliferación, asociada a la presencia de una isoforma de fibronectina que incluye el exón EDA     =    Pluripotent stem cells are propagated in a novel culture medium that preserves their essential properties and increases their proliferation rate, associated to the presence of fibronectin isoform that includes EDA exon
Autor : Losino, Noelia Ivana
Director : Guberman, Alejandra Sonia
Consejero : Pecci, Adali
Jurados : Monte, Martín  ; Paz, Dante Agustín  ; Bolontrade, Marcela Fabiana
Año : 2013-03-19
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Departamento de Química Biológica. Laboratorio de regulación génica en células madre
Grado obtenido : Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Biológica
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_5287_Losino
Idioma : Español
Area Temática : Biología / Biología Molecular y Celular
Biología / Biomedicina
Palabras claves : CELULAS MADRE EMBRIONARIAS; CELULAS MADRE PLURIPOTENTES INDUCIDAS; AUTO-RENOVACION; PLURIPOTENCIA; PROLIFERACION; MEDIO CONDICIONADO; FIBRONECTINA; EMBRYONIC STEM CELLS; INDUCED PLURIPOTENT STEM CELLS; SELF-RENEWAL; PLURIPOTENCY; PROLIFERATION; CONDITIONED MEDIUM; FIBRONECTIN
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