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Ver el documento (formato PDF)   Musikant, Alejandro Daniel.  "La trans-sialidasa como factor de virulencia en la infección experimental con Trypanosoma cruzi"  (2012)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
En el presente trabajo nos propusimos comprender los mecanismos asociados a la patología inducida por Trypanosoma cruzi en el modelo murino empleando cepas de baja y de alta virulencia. Estas últimas generan altos porcentajes de mortalidad en pocos días y expresan grandes cantidades de un factor de virulencia, la trans-sialidasa (TS) que induce, en la etapa temprana de la infección, apoptosis y desorganización de la histoarquitectura de órganos como el bazo, ganglio y timo. En esta Tesis Doctoral nos propusimos analizar las poblaciones celulares involucradas en las alteraciones producidas por la actividad de TS utilizando dos estrategias: - mediante la neutralización de la actividad circulante de TS durante la infección aguda observamos que el tratamiento no fue capaz de prevenir los desórdenes en las poblaciones linfocitarias maduras e inmaduras. El análisis de marcadores de migración linfocitaria permitió describir por primera vez que el parásito altera el tráfico de los linfocitos B en el bazo. - mediante un modelo de estimulación de la respuesta inmune con un antígeno definido observamos que el tratamiento con TS recombinante activa no fue suficiente para alterar el armado de los centros germinales. En la segunda etapa de este trabajo, analizamos la capacidad de T. cruzi de modular la expresión de las metaloproteasas (MMPs) del huésped. Observamos en la fase aguda de la infección, que las cepas/clones de alta virulencia inducen aumento de la actividad de MMP-2 y disminución de la actividad de MMP-9 plasmática, mientras que las de baja virulencia solo inducen disminución de MMP-9. El timo, ganglio e hígado de animales infectados con cepas/clones de alta virulencia poseen alterada la actividad de estas dos MMPs y observamos el mismo fenómeno en una línea celular de fibroblastos humanos. Utilizando ensayos in vivo e in vitro demostramos que la actividad de TS está relacionada con el aumento de la actividad de MMP-2. En este último sistema determinamos que el efecto es por hidrólisis de ácido siálico y pudimos reproducirlo utilizando neuraminidasas de origen bacteriano. Por último describimos vías de transducción de señal asociadas al aumento de la actividad de MMP-2 por la acción de TS y las neuraminidasas ensayadas. Nuestros hallazgos constituyen un aporte novedoso acerca del comportamiento de las MMPs en la infección murina por T. cruzi y su modulación diferencial dependiente de la virulencia. Es destacable que la modulación de MMP-2 está asociada a la actividad de TS que es altamente expresada en las mismas cepas que son inductoras de MMP-2 en la infección experimental.

Abstract:
In this work we have studied mechanisms associated with Trypanosoma cruzi pathology in a murine model employing different virulences strains. High-virulence parasites induce an increase mortality rate in a few days and also express high amount of trans-sialidasa (TS), a virulence factor that induces apoptosis and histological disorganization of organs such as spleen, thymus and lymph. In this thesis we analyze the cell populations involved in the alterations produced by the activity of TS using two strategies: - by neutralizing the activity of circulating TS during the acute phase of infection we observed that this treatment was not able to prevent disturbances in the mature and immature lymphocyte populations. The analysis of lymphocyte migration markers allow us to describe for the first time that the parasite alters B lymphocytes traffic in the spleen. - by using a immune response stimulation model with a specific antigen we showed that active recombinant TS treatment was not able to alter the assembly of the germinal centers. In the second stage of this work, we analyze if T.cruzi was able to modulate host matrix metalloproteinases (MMPs) expression. We showed that during the acute phase of infection high-virulence parasites (with detectable TS activity) induce an increase MMP-2 and diminished MMP-9 plasmatic activity and low-virulence parasites only induce reduction of MMP-9 plasmatic activity. Organs such as thymus, lymph and liver of infected animals with high-virulence parasites have an altered activity of both MMPs and the same results were observed in a human trofobroblast cell line. Using both in vivo and in vitro experiments we showed that TS activity is related with the increase of MMP-2 activity. We determined in vitro that the mechanism of the increase of MMP-2 is the hydrolysis of sialic acid and this was confirmed by using bacteria neuraminidases. Finally, we described signaling transduction pathways related to the increase of MMP-2 activity induced by TS and neuraminidases. Our findings constitute a novel contribution regarding MMPs behavior in murine infection by T. cruzi and differential modulation by different strains. Besides, modulation of MMP-2 activity is associated with TS, a virulence factor that is highly expressed in those strains that induce MMP-2 in the experimental infection.

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Registro:
Título : La trans-sialidasa como factor de virulencia en la infección experimental con Trypanosoma cruzi     =    Trans-sialidase as virulence factor in experimental infection by Trypanosoma cruzi
Autor : Musikant, Alejandro Daniel
Director : Leguizamón, María Susana
Consejero : Gürtler, Ricardo
Jurados : Damonte, Elsa  ; González Cappa, Stella Maris  ; Bottasso, Oscar Adelmo
Año : 2012
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Grado obtenido : Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Ciencias Biológicas
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_5303_Musikant
Idioma : Español
Area Temática : Biología / Biomedicina
Biología / Virología
Palabras claves : TRYPANOSOMA CRUZI; TRANS-SIALIDASA; METALOPROTEASAS DE MATRIZ EXTRACELULAR; VIRULENCIA; POBLACIONES LINFOCITARIAS PERIFERICAS; TRYPANOSOMA CRUZI; TRANS-SIALIDASE; MATRIX METALLOPROTEINASES; VIRULENCE; PERIPHERAL LYMPHOCYTE POPULATIONS
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