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Ver el documento (formato PDF)   Dodes Traian, Martín Miguel.  "Estudio de las interacciones entre fosfolípidos y proteínas integrales de membrana. Efectos sobre la actividad enzimática de una ATPasa transportadora de Ca2+"  (2014)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
Las membranas celulares son estructuras dinámicas complejas de composición bioquímica muy diversa. Las interacciones específicas lípidolípido y lípido-proteína pueden generar dominios estables o transientes de composición y función biológica diferenciales. En este trabajo, abordamos el estudio de la regulación de la actividad de una proteína integral de membrana, la bomba de calcio de membrana plasmática (PMCA) por anfifilos que integran el sistema en el cual se la reconstituye. En micelas de lípidos y detergente, pudimos verificar que la actividad depende de la proporción relativa de estas especies y postulamos un modelo que explica esta dependencia en base al intercambio de anfifilos a nivel del dominio transmembrana. El análisis realizado con diversos métodos espectroscópicos mostró que los cambios estructurales asociados a la activación por lípidos serían sutiles pero suficientes para transducir una señal de activación al dominio citoplasmático de PMCA. Utilizando espectroscopía de correlación de fluorescencia y la sonda fluorescente Laurdan observamos que la actividad depende además de la fluidez del entorno y del tamaño de las micelas. Para extender este estudio al entorno natural de las proteínas -la membrana celular- evaluamos diversas sondas fluorescentes y pudimos determinar que la sonda C-Laurdan permite estudiar por microscopía confocal la organización de membranas biológicas.

Abstract:
Cellular membranes are dynamic complex structures with a highly diverse biochemical composition. Specific lipid-lipid and lipid-protein interactions can generate transient or stable domains of particular composition and biological function. In this work, we study the regulation of the activity of an integral membrane protein, the plasma membrane calcium pump (PMCA), by phospholipids that make up the reconstitution system. Working in a mixed micelles lipid/detergent system, we verify that the activity depends on the relative proportion of these species and we posited a model that explains this relationship by the exchange between amphiphiles at the protein transmembrane domain. The analysis performed by spectroscopic methods showed that the structural changes associated with the activation by lipids are subtle but enough to transduce an activation signal to the cytoplasmic domain of PMCA. Using fluorescence correlation spectroscopy and the fluorescent probe Laurdan, we observed that the activity is also related to micelle size and the fluidity of the protein lipidic microenvironment. To extend this study to the natural environment of the protein –the cellular membrane- we assayed the performance of several fluorescent probes and we could determine that the probe CLaurdan allows studying the organization of biological membranes by confocal microscopy.

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Registro:
Título : Estudio de las interacciones entre fosfolípidos y proteínas integrales de membrana. Efectos sobre la actividad enzimática de una ATPasa transportadora de Ca2+     =    Study of the interactions between phospholipids and integral membrane proteins. Effects on the enzymatic activity of a Ca2+ transport ATPase
Autor : Dodes Traian, Martín Miguel
Director : González Flecha, Francisco Luis
Levi, Valeria
Consejero : Calvo, Juan Carlos
Jurados : Caramelo, Julio J.  ; Sánchez Donoso, Susana  ; Rossi, Rolando C.
Año : 2014
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Departamento de Química Biológica
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas (IQUIFIB)
Grado obtenido : Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Biológica
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_5491_DodesTraian
Idioma : Español
Area Temática : Química / Química Biológica
Biología / Biología Molecular y Celular
Palabras claves : PMCA; FOSFOLIPIDOS; BIOMEMBRANAS; PROTEINAS DE MEMBRANA; MICROSCOPIA CONFOCAL; C-LAURDAN; REGULACION ACTIVIDAD ENZIMATICA; PMCA; PHOSPHOLIPIDS; BIOMEMBRANES; CONFOCAL MICROSCOPY; MEMBRANE PROTEINS; C-LAURDAN; ENZYMATIC ACTIVITY REGULATION
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