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Ver el documento (formato PDF)   Ruiz, Verónica.  "Factores involucrados en la interacción inicial de Brucella suis con el hospedador: rol de los autotransportadores triméricos"  (2014)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
El género Brucella comprende patógenos intracelulares facultativos que causan una zoonosis conocida como brucelosis. Esta zoonosis es una de las más dispersas alrededor del mundo y afecta a una amplia variedad de mamíferos, entre ellos muchos de importancia agropecuaria. Un aspecto fundamental en la virulencia de Brucella reside en su capacidad de invadir y replicar dentro de células fagocíticas y no fagocíticas. El objetivo del trabajo de tesis fue identificar y caracterizar moléculas de B. suis asociadas a la adhesión y/o invasión a las células del hospedador. Mediante análisis bioinformáticos del genoma de B. suis 1330 se identificaron posibles proteínas que potencialmente podrían cumplir una función en la adhesión y/o invasión. En esta tesis se estudiaron tres de las proteínas candidatas (BtaE, BtaF y MapA). Diferentes análisis in silico indicaron que BtaE y BtaF pertenecen a la familia de los autotransportadores triméricos, los cuales median su propia translocación a través de la membrana externa. Enfoques mutacionales y heterólogos demostraron que BtaE y BtaF están involucradas en la adhesión a células no fagocíticas del hospedador y a componentes de la matriz extracelular. En particular, BtaE confirió adhesión a ácido hialurónico mientras que BtaF conferiría una adhesión promiscua a una amplia variedad de componentes de la matriz extracelular del hospedador y participaría en la formación de un biofilm in vitro. La adhesina BtaF cumpliriría una función adicional ya que confirió a la bacteria que la porta tolerancia a la actividad bactericida del complemento presente en el suero. Ambos autotransportadores fueron necesarios para que B. suis genere una completa virulencia en ratones inoculados intragástricamente. Por otro lado, por inmunofluorescencia se pudo detectar a BtaE, BtaF y a la adhesina BmaC en un número reducido de células pero en todos los casos las adhesinas se localizaron en el polo nuevo bacteriano generado luego de la división asimétrica de Brucella. Se propuso que en Brucella dicho polo estaría funcionalmente diferenciado para la adhesión. En cuanto a MapA, la cepa mutante defectiva en esta proteína fue menos eficiente en la adhesión a células no fagocíticas. Sin embargo, la mutante también presentó una sensibilidad notable a diversos compuestos, como polimixina B, Triton X-100 y lisozima, sugiriendo que la membrana externa se encuentra alterada. Proponemos que MapA estaría involucrada en la síntesis de algún componente de membrana, lo cual a su vez podría afectar directa o indirectamente la adhesión a componentes del hospedador y alterar la resistencia característica de Brucella al sistema inmune del hospedador. Estudios futuros permitirán dilucidar la función bioquímica de MapA en la biogénesis de la membrana de Brucella y su rol en la interacción de la bacteria con el hospedador.

Abstract:
The Brucella genus contains facultative intracellular pathogens, which cause a zoonotic disease called brucellosis. This zoonos is spread around the world and affects a wide range of mammals, among them many of agricultural importance. A fundamental aspect in the virulence of Brucella is its ability to invade and replicate within phagocytic and non-phagocytic cells. The aim of this thesis was to identify and characterize Brucella suis molecules associated to adhesion and/or invasion of host cells. Proteins that potentially could play a role in adhesion and/or invasion were identified through bioinformatic analysis of the B. suis 1330 genome. In this thesis three of the candidate proteins (BtaE, BtaF and MapA) were studied. Different in silico analysis indicated that BtaE and BtaF belong to the trimeric autotransporter family, which mediate their own translocation across the outer membrane. Mutational and heterologous aproaches demostrated that BtaE and BtaF are involved in the adhesion to non-phagocytic cells and components of the extracellular matrix. Particularly, it was shown that BtaE confers adhesion to hyaluronic acid while BtaF confers a promiscuous adhesion to a variety of compounds of the extracellular matrix and it would be involved in the formation of biofilms in vitro. The adhesin BtaF was involved in an additional function since it conferred the bacteria that carried it, tolerance to the bactericidal activity of the complement present in serum. Both autotransporters were necessary for B. suis to exhibit a full virulence in mice inoculated intragastrically. On the other hand, by immunofluorescence BtaE, BtaF and BmaC were detected in a reduced number of cells but in all cases the adhesins were localized at the new bacterial pole generated after the asymmetric division of Brucella. We propose that this pole of Brucella is functionally differentiated for adhesion. Regarding MapA, the mutant strain defective in this protein was less efficient in the adhesion to non-phagocytic cells. However, this mutant also presented a remarkable sensitivity to several compounds such as polymyxin B, Triton x-100 and lysozyme, suggesting that the bacterial outer membrane is altered. We propose that MapA would be involved in the synthesis of some membrane component, which could directly or indirectly affect the adhesion to components of the host and alter the characteristic resistance of Brucella to the immune system of the host. Future studies will be carried out to determine the biochemical function of MapA in the biogenesis of Brucella´s membrane and its role in the interaction of the bacteria with the host.

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Registro:
Título : Factores involucrados en la interacción inicial de Brucella suis con el hospedador: rol de los autotransportadores triméricos     =    Factors involved in the initial interaction of Brucella suis with the host: role of trimeric autotransporters
Autor : Ruiz, Verónica
Director : Zorreguieta, Angeles
Consejero : Zorreguieta, Angeles
Jurados : Cataldi, Angel Adrián  ; Ugalde, Juan Esteban  ; García, Cybele Carina
Año : 2014
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires (IIBBA)
Grado obtenido : Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Biológica
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_5501_Ruiz
Idioma : Español
Area Temática : Biología / Patobiología
Palabras claves : BRUCELLA; AUTOTRANSPORTADOR; ADHESINA; VIRULENCIA; COMPLEMENTO; POLO NUEVO; MEMBRANA EXTERNA; BRUCELLA; AUTOTRANSPORTER; ADHESIN; VIRULENCE; COMPLEMENT; NEW POLE; OUTER MEMBRANE
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