Tesis > Documento


Ver el documento (formato PDF)   Guardia, Carlos M.A..  "Del átomo a la célula: determinantes moleculares que definen la función de galectinas humanas"  (2014-05-30)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
URL:
     
Resumen:
Las galectinas constituyen una familia de proteínas altamente conservadas a través de la evolución con capacidad de unir carbohidratos presentes en diferentes glicoproteínas de la membrana plasmática y la matriz extracelular. Estas proteínas reconocen en forma específica unidades repetidas de N-acetil lactosamina presentes en N- y O-glicanos. El énfasis del trabajo se centró en determinar los detalles estructurales que diferencian a cada una de estas proteínas, buscando correlaciones entre la dinámica molecular, la estabilidad y la selectividad de unión a glicanos para desencadenar la función celular para la que han sido evolutivamente selecccionadas. A través de una aproximación multidisciplinaria, se empleó una variedad de técnicas de simulación computacional y diversas estrategias experimentales para estudiar los mecanismos y determinantes moleculares de regulación de la unión a glicanos en galectinas y posterior activación de su función en diversos cultivos celulares. Las metodologías empleadas consistieron desde simulaciones de dinámica molecular clásica hasta la expresión y purificación de proteínas recombinantes y ensayos de unión al ligando, cinéticas de oxidación y apoptosis in vitro mediantes citometría de flujo y diversas técnicas de microscopía óptica y electrónica. En primer lugar, este estudio se ha centrado en la caracterización y comparacion estructural y dinámica de cada galectina y su especificidad por diversos glicanos fisiológicamente relevantes. En segundo lugar, se ha estudiado el mecanismo de oxidación y función de enlaces disulfuro en galectina-1, proponiendo la existencia de un interruptor molecular presente sólo en este miembro de la familia. El mismo explicaría el cambio de función al cambiar de estado redox. Por último, se estudió el impacto de la estructura cuaternaria en la unión a glicanos específicos en glicoproteínas y la formación de redes supramoleculares de glicanos en la superficie de la célula.

Abstract:
Galectins are members of a family of highly conserved proteins characterized by the ability to bind saccharide motifs in various cell glycoproteins and the extracellular matrix. These proteins specifically recognize repeating units of N-acetyl lactosamine present in N- and O-glycans. The aim of this work was to define the details and structural motifs that distinguish each individual member of the galectin family, seeking for correlations between the molecular dynamics, stability and selectivity for glycans displayed by these lectins and their proposed functional activity. Using a multidisciplinary approach, in the present study we used a wide variety of computational simulation tools and different experimental approaches to explore the mechanisms and molecular determinants that regulate glycan binding of galectins in cell cultures. The employed methodologies ranged from classical molecular dynamics simulations to the expression and purification of recombinant proteins and ligand-binding assays, oxidation kinetics and apoptosis assays using flow cytometry and various optical and electronic microscopy techniques. First, we have focused on the structural characterization and comparison of molecular dynamics of each galectin in the vicinity of their ligand binding site and mechanism of oxidation and disulfide bond formation in galectin-1 protein, seggesting the presence of a molecular switch that explains the function change during redox state turnover. Finally, we studied the impact of the quaternary structure in the binding properties of galectins to specific glycans and analyzed the ability of galectin-1 to form supramolecular membrane structures called lattices when they interact with specific glycans on the surface of target cells.

* A este resumen le pueden faltar caracteres especiales. Consulte la versión completa en el documento en formato PDF

Registro:
Título : Del átomo a la célula: determinantes moleculares que definen la función de galectinas humanas     =    From the atom to the cell: molecular determinants that define the function of human galectins
Autor : Guardia, Carlos M.A.
Director : Estrin, Darío Ariel
Rabinovich, Gabriel Adrián
Consejero : Cukiernik, Fabio Daniel
Jurados : Mariño, Karina Valeria  ; Sica, Mauricio Pablo  ; Aldabe Bilmes, Sara A.D.
Año : 2014-05-30
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Instituto de Química Física de los Materiales Medio Ambiente y Energía (INQUIMAE). Grupo de Modelado Molecular
Instituto de Biología y Medicina Experimental (IByME). Laboratorio de Inmunopatología
Grado obtenido : Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Inorgánica, Analítica y Química Física
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_5585_Guardia
Idioma : Español
Area Temática : Química / Química Biológica
Química / Química Computacional
Química / Química Supramolecular
Palabras claves : GALECTINA; DINAMICA MOLECULAR; OXIDACION; DICROISMO CIRCULAR; FLUORESCENCIA; GLICOSILACION; GALECTIN; MOLECULAR DYNAMICS; OXIDATION; CIRCULAR DICHROISM; FLUORESCENCE; GLYCOSYLATION
URL al Documento : 
URL al Registro : 
hola chau _gs.DocumentHeader_ chau2 _documentheader_ chau3
Estadísticas:
     http://digital.bl.fcen.uba.ar
Biblioteca Central Dr. Luis Federico Leloir - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - Universidad de Buenos Aires
Intendente Güiraldes 2160 - Ciudad Universitaria - Pabellón II - C1428EGA - Tel. (54 11) 4789-9293 int 34