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Ver el documento (formato PDF)   Pizzurro, Gabriela Andrea.  "Desarrollo de vacunas terapéuticas con células dendríticas humanas para melanoma: optimización de parámetros fenotípicos y funcionales in vitro e in vivo de la vacuna experimental CD/Apo-Nec"  (2016-11-29)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
El presente trabajo de Tesis se centra principalmente en el estudio en profundidad y la optimización del diseño de la vacuna experimental CD/Apo-Nec para el melanoma cutáneo humano, desarrollada previamente en nuestro laboratorio. En primer lugar, se caracterizó la interacción entre las células dendríticas y células de melanoma g-irradiadas (Apo-Nec) durante su co-cultivo. Luego de la detección de un incremento en los cuerpos lipídicos citoplasmáticos de las células Apo-Nec post-irradiación, se determinaron sus características bioquímicas y la dinámica de su formación. El desempeño de las células dendríticas fue evaluado en presencia de distinto contenido lipídico, caracterizando la fagocitosis, el cargado antigénico y su capacidad estimulatoria, en diferentes estados de maduración. Luego, se compararon características migratorias de la vacuna in vitro e in vivo en diferentes estados de maduración. Se describió la llegada de la vacuna a los ganglios linfáticos en ratones nude. Junto a la respuesta quemotáctica, se determinaron los factores del sistema responsables de la motilidad y distribución de la vacuna luego de su administración por vía subcutánea. Por último, se determinó el perfil inmunoestimulatorio de la vacuna, junto con su capacidad de activar clones de células T antígeno-específicos en el tiempo. Se caracterizó además la respuesta generada por la vacuna sobre linfocitos naïve, en cuanto a su activación y capacidad proliferativa y citotóxica frente a células de melanoma. En resumen, el análisis de distintas variables presentes en las sucesivas etapas de la generación de la vacuna CD/Apo-Nec permitió determinar condiciones que influyen y mejoran sus características finales. Este diseño optimizado, el cual presenta claras evidencias de generar una respuesta inmunitaria anti-tumoral eficaz, podrá ser evaluado con futuros estudios en la clínica.

Abstract:
The present PhD Thesis project is mainly focused on the thorough analysis of the experimental DC/Apo-Nec vaccine for human cutaneous melanoma, in order to obtain an optimized design of the vaccine previously developed in our laboratory. First, the interaction between dendritic cells and g-irradiated melanoma cells (Apo-Nec) was characterized during the co-culture. As an increase in the cytoplasmic lipid body formation was detected in Apo-Nec cells after irradiation, a biochemical analysis and a description of their formation was performed. Dendritic cell function was assessed in the presence of different lipid body content, analyzing phagocytosis, antigen loading and stimulating capacity, at different maturation status. Then, the migratory pattern of the vaccine was analyzed and compared in vitro and in vivo at different maturation status. Vaccine lymph node homing was described in the nude mouse model. Besides the chemotactic response, the main components responsible of vaccine motility and distribution after subcutaneous administration were determined. Finally, the immunostimulatory profile of the vaccine was determined, along with its capacity to activate antigen-specific T-cell clones at different times after co-culture. The vaccine-induced response on naïve lymphocytes was also evaluated, regarding cell activation, proliferative response and cytotoxic function against melanoma cells. Altogether, the analysis of variables present during several stages of the DC/Apo-Nec vaccine production and administration resulted in a more detailed and improved vaccine design. This optimized model has provided strong evidence that suggests it could generate an efficient anti-tumor immune response that should be further evaluated in the clinic.

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Registro:
Título : Desarrollo de vacunas terapéuticas con células dendríticas humanas para melanoma: optimización de parámetros fenotípicos y funcionales in vitro e in vivo de la vacuna experimental CD/Apo-Nec     =    Development of human dendritic-cell based therapeutic vaccines for melanoma: optimization of in vitro and in vivo phenotypic and functional parameters of the experimental DC/Apo-Nec vaccine
Autor : Pizzurro, Gabriela Andrea
Director : Mordoh, José
Director Asistente : Barrio, María Marcela
Consejero : Kordon, Edith Claudia
Jurados : Laderach, Diego J.  ; Vermeulen, Mónica  ; Rumbo, Martín
Año : 2016-11-29
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Departamento de Química Biológica
Centro de Investigaciones Oncológicas - Fundación Cáncer
Grado obtenido : Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Biológica
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_6093_Pizzurro
Idioma : Español
Area Temática : 
Palabras claves : INMUNOTERAPIA; CELULAS DENDRITICAS; MELANOMA; IRRADIACION GAMMA; CUERPOS LIPIDICOS; MIGRACION A GANGLIOS LINFATICOS; RESPUESTA INMUNITARIA ANTI-TUMORAL; IMMUNOTHERAPY; DENDRITIC CELLS; MELANOMA; GAMMA IRRADIATION; LIPID BODIES; LYMPH NODE HOMING; ANTI-TUMOR IMMUNE RESPONSE
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