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Ver el documento (formato PDF)   Holgado, María Pía.  "Estudio de la deleción de tres genes inmunomoduladores del genoma de MVA: efecto sobre su inmunogenicidad"  (2017-02-10)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
El virus Vaccinia Ankara modificado (MVA, del inglés Modified Vaccinia Ankara) es un vector viral atenuado que aún conserva numerosos genes inmunomoduladores en su genoma. Nuestro grupo reportó anteriormente la optimización de este vector luego de eliminar el gen viral C12L, el cual codifica para la proteína de unión a IL-18. En este trabajo se analizó la inmunogenicidad del vector MVA al cual se le delecionaron de manera simultánea los genes A44L, relacionado con la síntesis de esteroides, y A46R, un inhibidor de la señalización mediada por receptores Toll (MVAΔA44L-A46R); o también incluyendo la deleción del gen C12L, previamente descripto (MVAΔC12L/ΔA44L-A46R). Para ello, se evaluó la respuesta celular T contra epítopes de Vaccinia tanto en bazo como en ganglios inguinales, drenantes al sitio de inoculación, en ratones de la cepa C57BL/6. Se observó que la magnitud de la respuesta adaptativa, tanto en la etapa aguda como de memoria, fue mayor en los animales inmunizados con los vectores delecionados en relación a aquellos que recibieron el vector de la cepa salvaje (MVAwt). Asimismo, el vector MVAΔC12L/ΔA44L-A46R indujo una respuesta celular T específica de memoria de mayor calidad, caracterizada tanto por la bifuncionalidad de las células T-CD8+ (expresión simultánea de CD107a/b e IFN-γ) como por la capacidad de proliferación específica de las células T-CD4+ y CD8+. Al estudiar la respuesta innata generada por el MVAΔC12L/ΔA44L-A46R, se observó que este vector indujo una mayor producción de citoquinas relacionadas con la generación de una respuesta celular T, tales como IL-12 e IFN-γ, así como mediadores pro inflamatorios y antivirales como IL-1β e IFN-β. En conclusión, este estudio describe por primera vez que la deleción simultánea de los genes inmunomoduladores del genoma de MVA, cuyas funciones se encuentran inter-relacionadas, tales como A44L, A46R y C12L constituye una metodología adecuada para incrementar la inmunogenicidad del vector generando de esta manera una mayor respuesta inmune tanto innata como adaptativa. Esto convierte al vector MVA en una herramienta útil y versátil para ser utilizada en el campo del desarrollo de vacunas.

Abstract:
Modified Vaccinia Ankara virus (MVA) is an attenuated vector that still retains many immunomodulatory genes in its genome. Our group previously reported the optimization of this viral vector after removing the C12L gene, coding for the IL-18 binding protein. In this work, we analyzed the immunogenicity of MVA vectors harboring the simultaneous deletion of A44L gene, related to steroid synthesis, and A46R, a TLR-signaling inhibitor (MVAΔA44L-A46R); or also including a deletion of C12L (MVAΔC12L/ΔA44L-A46R), previously described. For this, T-cell responses against Vaccinia virus epitopes were evaluated in C57BL/6 mice in spleen and inguinal lymph-nodes, draining to the site of inoculation. The results showed that the magnitude of the adaptive response, in both the acute and memory phases, was higher in mice immunized with the deleted vectors in relation to those that received the MVAwt. Furthermore, MVAΔC12L/ΔA44L-A46R induced specific memory T cell responses of higher quality, characterized by the CD8 T-cell bifunctionality (simultaneous expression of CD107a/b and IFN-γ) and the specific proliferation capacity of CD4+ and CD8+ T-cells. The study of innate immune responses generated by the MVAΔC12L/ΔA44L-A46R indicated that this vector induced an increased production of cytokines associated with the generation of a specific Tcell response, such as IL-12 and IFN-γ and also, pro inflammatory and antiviral mediators like IL-1β and IFN-β. In summary, this study describes for the first time that the simultaneous deletion of immunomodulatory genes from MVA genome, whose functions are inter-related, such as A44L, A46R and C12L is an appropriate methodology to enhance the immunogenicity of the vector, enhancing both innate and adaptive immune responses. This type of strategies converts MVA vector in a useful and versatile tool to be used in the vaccine development field.

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Registro:
Título : Estudio de la deleción de tres genes inmunomoduladores del genoma de MVA: efecto sobre su inmunogenicidad     =    Study of the deletion of three immunomodulatory genes from the MVA genome: effect on its immunogenicity
Autor : Holgado, María Pía
Director : Gherardi, María Magdalena
Consejero : Scolaro, Luis Alberto
Jurados : Berinstein, Analía  ; García, Cybele C.  ; Giordano, Mirta N.
Año : 2017-02-10
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Departamento de Química Biológica
Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y SIDA (INBIRS)
Grado obtenido : Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Biológica
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_6100_Holgado
Idioma : Español
Area Temática : Biología / Virología
Biología / Inmunología
Palabras claves : MVA; RESPUESTA CELULAR T; VACUNAS; MVA; T CELL RESPONSE; VACCINE
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