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Ver el documento (formato PDF)   Esteva, María Jimena.  "Caracterización funcional de virus de la inmunodeficiencia de simios (SIV) quiméricos expresando diferentes dominios de la proteína cápside del virus de la inmunodeficiencia de felinos (FIV)"  (2016-12-12)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
La formación de partículas lentivirales resulta de la multimerización de la poliproteína Gag, la cual contiene toda la información necesaria para autoensamblarse y brotar al medio extracelular a través de la membrana plasmática. Durante la maduración de los viriones, la proteína cápside (CA), que corresponde al dominio central de Gag, se condensa generando el core viral que preserva la integridad del complejo ribonucleoproteico requerido para iniciar un nuevo ciclo de replicación viral. Los virus de la inmunodeficiencia de simios (SIV) y de felinos (FIV) son dos lentivirus evolutivamente distantes cuyas proteínas CA no han sido aún estudiadas. Con el objeto de establecer la relación funcional entre los dominios CA de SIV y de FIV, construimos SIV quiméricos en los cuales la región codificante para la CA fue parcial o totalmente reemplazada por su equivalente de la CA de FIV. La caracterización fenotípica de las quimeras nos permitió agruparlas en tres categorías: un grupo formado por virus quiméricos capaces de ensamblarse en viriones, pero cuya maduración causa la inestabilidad de la CA de FIV; un segundo grupo representado únicamente por el SIV quimérico llevando el dominio N-terminal (NTD) de la CA de FIV y que exhibe un fenotipo de ensamblado defectivo; y un tercer grupo formado por los virus quiméricos que se ensamblan en viriones exhibiendo una CA de FIV madura estable, que incorporan la glicoproteína de envoltura, y que contienen niveles salvajes del ARN genómico viral y de la transcriptasa reversa. Sin embargo, este último grupo de SIV quiméricos resultó ser no infeccioso debido a defectos en alguna etapa posterior a la entrada viral. Por otra parte, demostramos que el dominio C-terminal (CTD) de la CA de FIV presenta la capacidad intrínseca de dimerizar in vitro y de formar oligómeros de alto peso molecular. Esto, junto con nuestros resultados que muestran que el CTD de la CA de FIV es suficiente para el ensamblado de la poliproteína quimérica Gag de SIV, provee evidencia de que el CTD de la CA exhibe mayor plasticidad funcional que el NTD. En su conjunto, nuestros resultados aportan información relevante sobre la homología funcional entre los dominios CA de las poliproteínas Gag de los lentivirus de primates y de no primates y contribuyen a nuestro conocimiento sobre cómo han evolucionado los requerimientos para el ensamblado de viriones infecciosos en los retrovirus.

Abstract:
The formation of lentiviral particles results from the multimerization of the Gag polyprotein, which contains all the information necessary for its self-assembly and budding into the extracellular medium. During virion maturation, the capsid (CA) protein, which corresponds to the central domain of Gag, generates the core structure that preserves the integrity of the ribonucleoprotein complex required to initiate a new round of viral replication. The simian and feline immunodeficiency viruses (SIV and FIV, respectively) are two evolutionarily distant lentiviruses whose CA proteins have not as yet been studied. To gain insight into the functional relationship between the SIV and FIV CA domains, we constructed chimeric SIVs in which the CA-coding region was partially or totally replaced by the equivalent region of the FIV CA. The phenotypic characterization of the chimeras allowed us to group them into three categories: the chimeric viruses that, while being assembly-competent, exhibit a virionassociated unstable FIV CA; a second group represented only by the chimeric SIV carrying the N-terminal domain (NTD) of the FIV CA which proved to be assemblydefective; and a third group constituted by the chimeric viruses that produce virions exhibiting a mature and stable FIV CA protein, and which incorporate the envelope glycoprotein and contain wild-type levels of viral genome RNA and reverse transcriptase. However, further analysis of the latter group of chimeric SIVs demonstrated that they are non-infectious due to a post-entry impairment. Furthermore, we show that the carboxyl-terminus domain (CTD) of the FIV CA has an intrinsic ability to dimerize in vitro and form high-molecular-weight oligomers, which, together with our finding that the FIV CA-CTD is sufficient to confer assembly competence to the resulting chimeric SIV Gag polyprotein, indicates that the CA-CTD exhibits more functional plasticity than the CA-NTD. Taken together, our results provide relevant information on the functional homology between the CA domains of primate and nonprimate lentiviral Gag polyproteins and contribute to our understanding of how the requirements for the assembly of infectious virions have evolved among retroviruses.

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Registro:
Título : Caracterización funcional de virus de la inmunodeficiencia de simios (SIV) quiméricos expresando diferentes dominios de la proteína cápside del virus de la inmunodeficiencia de felinos (FIV)     =    Functional characterization of chimeric simian immunodeficiency viruses (SIV) expressing different domains of the feline immunodeficiency virus (FIV) capsid protein
Autor : Esteva, María Jimena
Director : González, Silvia A.
Consejero : Candurra, Nélida
Jurados : Damonte, Elsa B.  ; Campos, Rodolfo H.  ; Talarico, Laura B.
Año : 2016-12-12
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Universidad de Belgrano (UB). Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Laboratorio de Virología
Grado obtenido : Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Biológica
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_6130_Esteva
Idioma : Español
Area Temática : Biología / Virología
Palabras claves : VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA DE SIMIOS; VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA DE FELINOS; ENSAMBLADO DE LENTIVIRUS; POLIPROTEINA GAG; PROTEINA CAPSIDE; LENTIVIRUS QUIMERICOS; REPLICACION DE LENTIVIRUS; SIMIAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS; FELINE IMMUNODEFICIENCY VIRUS; LENTIVIRAL ASSEMBLY; GAG POLYPROTEIN; CAPSID PROTEIN; CHIMERIC LENTIVIRUSES; LENTIVIRUS REPLICATION
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