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Ver el documento (formato PDF)   Grodzielski, Matías.  "Estudio de los mecanismos patogénicos relacionados con la trombopoyesis en la trombocitopenia autoinmune"  (2017-03-23)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
La presente Tesis de Doctorado propuso investigar la existencia de alteraciones en el proceso de trombopoyesis en la trombocitopenia inmune (PTI). Para ello se utilizó un modelo in vitro de diferenciación de megacariocitos a partir de progenitores hematopoyéticos CD34+ normales. Al día 13 de cultivo, los megacariocitos maduros se incubaron con muestras de plasma de pacientes con PTI evaluando su efecto sobre la formación de proplaquetas, la capacidad de adhesión y spreading, la apoptosis celular y la activación de señales intracelulares al contacto con proteínas de matriz de médula ósea. Los plasmas de PTI produjeron una inhibición dosis-dependiente de la trombpoyesis, lo que se acompañó de alteraciones morfológicas en las proplaquetas. Además, estos plasmas no afectaron la madurez ni la sobrevida de los megacariocitos, lo que sugiere que las alteraciones en la producción plaquetaria son ocasionadas por un efecto directo sobre el proceso de trombopoyesis. La fracción de inmunoglobulinas G purificadas de los pacientes reprodujo la inhibición, mientras que la eliminación de los autoanticuerpos del plasma la revirtió, demostrando que son los autoanticuerpos los responsables, al menos en parte, de estas alteraciones. Además de la trombopoyesis, los plasmas con autoanticuerpos dirigidos contra las glicoproteínas IIb- IIIa y Ia-IIa afectaron la capacidad de adhesión y spreading de los megacariocitos a los ligandos medulares de estos receptores, fibrinógeno y colágeno I, respectivamente. En particular, la presencia de anticuerpos anti-GPIa-IIa de PTI provocó una pérdida de la capacidad fisiológica del colágeno I de inhibir la trombopoyesis, lo que sugiere que podría ocurrir liberación de plaquetas en forma prematura en el contexto del nicho osteoblástico medular. La existencia de alteraciones trombopoyéticas en presencia de plasmas de PTI sin autoanticuerpos detectados sugiere la existencia de autoanticuerpos dirigidos contra blancos alternativos. La presente Tesis de Doctorado expone resultados novedosos que demuestran que los autoanticuerpos de PTI tienen un efecto nocivo sobre la trombopoyesis y sobre otras funciones megacariocíticas, revelando nuevos mecanismos que contribuyen a la disminución del recuento de plaquetas en esta entidad.

Abstract:
This PhD thesis was aimed at investigate possible alterations in the thrombopoietic process in immune thrombocytopenia (ITP). To this end, an in vitro model of megakaryocyte differentiation from normal CD34+ hematopoietic progenitors was used. At day 13 of culture, mature megakaryocytes were incubated with plasma samples from patients with ITP and the effect on proplatelet formation was evaluated. Besides, we studied the ability of megakaryocytes to adhere and spread on different matrices, cellular apoptosis and the activation of intracellular signalling after contact with bone marrow matrix proteins. ITP plasmas induced a dose-dependent inhibition on thrombopoiesis, that was accompanied by morphological alterations in proplatelet architecture. In addition, these samples did not affect either maturity or survival of megakaryocytes, suggesting that alterations in platelet production are due to a direct effect on the thrombopoietic process. The purified fraction of immunoglobulins G from ITP patients reproduced the inhibition, while elimination of autoantibodies from plasma reverted it, demonstrating that autoantibodies are responsible, at least in part, for these alterations. In addition to thrombopoiesis, plasmas containing autoantibodies directed against glycoproteins IIb- IIIa and Ia-IIa affected megakaryocyte adhesion and spreading to the corresponding ligands, fibrinogen and collagen I, in bone marrow. In particular, the presence of anti- GPIa-IIa autoantibodies caused a loss of the physiological ability of collagen I to inhibit thrombopoiesis, suggesting that premature platelet release could occur in the context of the bone marrow osteoblastic niche. The finding of abnormalities on thrombopoiesis in the presence of ITP plasmas with no detectable autoantibodies suggests the presence of alternative targets of autoimmunity in these samples. This PhD thesis presents new results demonstrating that ITP autoantibodies have a deleterious effect on thrombopoiesis and other megakaryocytic functions, revealing new mechanisms that contribute to the decrease of the platelet count in this entity.

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Registro:
Título : Estudio de los mecanismos patogénicos relacionados con la trombopoyesis en la trombocitopenia autoinmune     =    Pathogenic mechanisms related to thrombopoiesis in autoimmune thrombocytopenia
Autor : Grodzielski, Matías
Director : Marta, Rosana F.
Consejero : Varone, Cecilia L.
Jurados : Gamberale, Romina  ; Nesse, Alcira B.  ; Isturiz, Martín A.
Año : 2017-03-23
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Instituto de Investigaciones Médicas ¨Alfredo Lanari¨ (IDIM). Laboratorio de Hematología Investigación
Grado obtenido : Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Biológica
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_6159_Grodzielski
Idioma : Español
Area Temática : Química / Química Biológica
Palabras claves : TROMBOCITOPENIA INMUNE; TROMBOPOYESIS; MEGACARIOCITOS; PROPLAQUETAS; AUTOANTICUERPOS; IMMUNE THROMBOCYTOPENIA; THROMBOPOIESIS; MEGAKARYOCYTES; PROPLATELETS; AUTOANTIBODIES
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