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Ver el documento (formato PDF)   Merlotti Ippólito, Antonela.  "Clusterina Fucosilada: una nueva glicoforma de clusterina capaz de interactuar con células dendríticas y de modular su funcionalidad"  (2017-03-16)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
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Resumen:
Clusterina es una glicoproteína de 70 kDa, secretada por diferentes tipos celulares y presente en casi todos los tejidos y fluidos corporales. Nuestro grupo de investigación demostró anteriormente que la clusterina presente en el semen se une a la molécula DC-SIGN, un receptor expresado por las células dendríticas (CDs), inhibiendo su interacción con el HIV. Esta propiedad no es compartida por la clusterina sérica debido a que clusterina del plasma seminal expresa un patrón inusual de glicosilación, caracterizado por la presencia de abundantes motivos fucosilados que le confieren la habilidad de unirse a DC-SIGN. De esta forma, la clusterina fucosilada presente en el semen representa una nueva glicoforma con propiedades biológicas diferentes a la clusterina sérica, la cual se encuentra glicosilada principalmente con motivos sialidados. Clusterina fue la primera chaperona extracelular descripta. La principal propiedad de las chaperonas extracelulares es su capacidad de interactuar con proteínas estresadas previniendo su agregación e inhibiendo el desarrollo de las enfermedades por depósito de proteínas. Posteriormente, los complejos chaperona- proteína son endocitados por diferentes tipos celulares y degradados. En la presente tesis demostramos que clusterina fucosilada aislada del plasma seminal, de igual forma que su contraparte sérica, actúa como chaperona extracelular interactuando con proteínas estresadas y previniendo su agregación. Demostramos la capacidad de clusterina fucosilada de dirigir proteínas estresadas hacia DC-SIGN presente en CDs, promoviendo la endocitosis de las mismas y su posterior degradación. Este proceso podría modular la función de las CDs y favorecer la presentación de los péptidos derivados de estas proteínas estresadas a los linfocitos T. En este sentido, demostramos que la unión de clusterina fucosilada a las CDs a través de DC-SIGN ejerce un importante efecto modulatorio ya que es capaz de estimular la expansión células T CD4+FOXP3+CD25+ promoviendo la tolerancia inmunológica. Estos hallazgos sugieren que clusterina fucosilada presente en el semen podría promover la tolerancia hacia antígenos paternos y de esta forma, la tolerancia materno-fetal. Numerosos trabajos demuestran que la producción de clusterina se encuentra incrementada en diferentes tumores malignos. Más aún, la producción exagerada de clusterina suele asociarse a una mayor agresividad tumoral y a un peor pronóstico. Sin embargo, la naturaleza de esta asociación no ha sido aún definida. En una segunda parte de la tesis, nos preguntamos si la clusterina producida por tumores podría expresar, tal como lo hace la clusterina seminal, un patrón de glicosilación que le permitiese interactuar con DC-SIGN y, de este modo, modular la funcionalidad de las CDs promoviendo la tolerancia hacia antígenos tumorales. Para contestar esta pregunta, realizamos una serie de ensayos utilizando muestras de tumores de mama de tipo Luminal. Los principales hallazgos luego de realizar estos ensayos fueron los siguientes: a) Clusterina presente en los tumores mamarios presenta motivos fucosilados; b) es capaz de unirse a DC-SIGN; c) DC-SIGN es expresado por células mieloides intratumorales. Estos resultados sugieren que clusterina fucosilada podría actuar como un mecanismo de escape tumoral a la respuesta inmune.

Abstract:
Clusterin is a secreted glycoprotein of 80 kDa present in almost all tissues and body fluids. Our group previously showed that semen clusterin binds to DC-SIGN, a C-type lectin receptor present on dendritic cells (DCs), inhibiting the interaction of HIV. This activity was dependent on fucosylated Lewis X and Lewis Y type glycans that confer clusterin the ability to bind with high affinity to DC-SIGN. Interestingly, in contrast with seminal plasma clusterin, serum clusterin does not interact with DC-SIGN. Clusterin was the first extracellular chaperone described. Extracellular chaperones bind to stress-damaged proteins, preventing the formation and deposition of insoluble aggregates and promoting the clearance of extracellular stressed proteins by receptor-mediated endocytosis followed by lysosomal degradation. Failure of these mechanisms contributes to the development of the so-called protein deposition diseases. In this thesis, we showed that fucosylated clusterin from seminal plasma, as its serum counterpart, acts as an extracellular chaperone interacting with stressed proteins and preventing their aggregation. We proved that fucosylated clusterin targets stressed proteins to DC-SIGN present on DCs, promoting their endocytosis and degradation. This process could modulate DC function favoring the presentation of stressed protein derived peptides to T lymphocytes. We demonstrated that fucosylated clusterin binding to DCSIGN on DCs promotes the expansion of CD4+FOXP3+CD25+ T-cells. These findings suggest that fucosylated clusterin present in semen could promote tolerance to paternal antigens favoring fetomaternal tolerance. Several works have shown that clusterin production is increased in malignant tumors. Moreover, the over-expression of clusterin is associated with more aggressive tumors and bad prognosis. Nevertheless, the nature of this association has not been defined. In the second part of this thesis, we analyzed the properties of clusterin expressed on Luminal breast cancer samples. The main results were the following: a) clusterin produced by breast tumors bears fucosylated motifs; b) it is able to bind to DCSIGN; c) DC-SIGN is expressed by intra-tumoral macrophages. We propose that fucosylated clusterin could be a novel mechanism of tumor escape from the immune response.

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Registro:
Título : Clusterina Fucosilada: una nueva glicoforma de clusterina capaz de interactuar con células dendríticas y de modular su funcionalidad     =    Fucosylated Clusterin: a novel clusterin glycoform able to interact with dendritic cells and modulate their functions
Autor : Merlotti Ippólito, Antonela
Director : Sabatté, Juan A.
Consejero : Vázquez, Elba
Jurados : Zwirner, Norberto W.  ; Toscano, Marta A.  ; Barrionuevo, Paula
Año : 2017-03-16
Editor : Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Filiación : Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida (INBIRS)
Grado obtenido : Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Biológica
Ubicación : Preservación - http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_6201_MerlottiIppolito
Idioma : Español
Area Temática : Química / Química Biológica
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