Registro:
| Documento: | Tesis Doctoral |
| Disciplina: | biologia |
| Título: | Metabolismo de poliaminas en tripanosomátidos : Ornitina decarboxilasa de Leishmania mexicana |
| Autor: | Sanchez, Cecilia Palmira |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Filiación: | Instituto de Investigaciones Bioquímicas "Fundación Campomar"
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| Publicación en la Web: | 2017-03-01 |
| Fecha de defensa: | 1993 |
| Fecha en portada: | 1993 |
| Grado Obtenido: | Doctorado |
| Título Obtenido: | Doctor en Ciencias Biológicas |
| Director: | Algranati, Israel D. |
| Idioma: | Español |
| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2603_Sanchez |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n2603_Sanchez.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n2603_Sanchez |
| Ubicación: | Dep.BIO 002603 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Sanchez, Cecilia Palmira. (1993). Metabolismo de poliaminas en tripanosomátidos : Ornitina decarboxilasa de Leishmania mexicana. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2603_Sanchez |
Resumen:
Las poliaminas son compuestos esenciales para el crecimiento yla proliferación celular: por este motivo se realizan grandes esfuerzospara la búsqueda de inhibidores selectivos de la biosíntesis de estassustancias con el objeto de detener el crecimiento de célulastumorales, así como de los microorganismos causantes de infecciones. Estudios recientes han propuesto el empleo de inhibidores de labiosíntesis de putrescina como una herramienta terapéutica útil paracontrolar el crecimiento de parásitos intracelulares. Por esta razón sedecidió estudiar el metabolismo de poliaminas en Trypanosoma cruziy Leishmania mexicana con el fin de encontrar diferencias en labiosíntesis de estos policationes entre el protozoo y la célula delmamífero huesped con el objeto de encontrar blancos específicos queal ser inhibidos determinen el bloqueo de la proliferaciónpermitiendo desarrollar nuevas estrategias quimioterápicas contra el Mal de Chagas y la Leishmaniasis. Se ha observado que los niveles intracelulares de poliaminas en T.cruzi en su forma epimastigote correlacionan con la fase decrecimiento. La putrescina, espermidina, espermina y cadaverinaalcanzan los valores máximos en la etapa logarítmica y luegodisminuyen hacia la fase estacionaria de crecimiento. En L. mexicanase observó un resultado similar pero en este parásito sólo se detectóputrescina y espermidina. La captación de poliaminas y sus probables precursores (ornitina, arginina y lisina) por T. cruzi y L. mexicana, como laconversión in vivo de dichos aminoácidos en poliaminas sugierenque en los tripanosomas la mayor parte de estas sustancias sontransportadas al interior de las células desde el medio externo,mientras que en Laishmania parece prevalecer la biosíntesis de lospolicationes a partir de ornitina. Se determinó que los extractos de L. mexicana poseen una altaactividad de Ornitina decarboxilasa (ODC). Se caracterizaron losrequerimientos para la máxima actividad catalítica, así comodiferentes propiedades de la enzima en relación a su estructura y laregulación de su actividad. La adición de cicloheximida y de poliaminas a los cultivosmostraron que la ODC de L. mexicana es estable y que su degradaciónno es regulada por poliaminas. La ODC es inhibida tanto in vivo comoin vitro por la adición de a DFMO. Se observó que la actividad enzimática es fuertementedependiente de la presencia de su coenzima, el piridoxal 5'-fosfato. La enzima preparada en presencia de concentraciones saturantes de PLP es más resistente a la inactivación por efecto de la temperaturay es menos sensible a la acción de inhibidores. Por otra parte, se observó que la enzima obtenida en ausenciadel cofactor contiene PLP endógeno, ya que la remoción total de lacoenzima por tratamiento con hidroxilamina produce la apoenzimainactiva, la cual requiere PLP para recobrar su actividad enzimáticamediante una unión que parece inducir cambios conformacionales dela proteína. Probablemente, la ODC no presenta homología estructural ensus regiones antigénicas con la enzima aislada de células animales, yaque no se observó reacción cruzada cuando se inmunoprecipitó la OCDdel parásito con un anticuerpo policlonal contra ODC de riñón deratón. La enzima se purificó parcialmente a partir de promastigotesde L. mexicana mediante la precipitación con acetona ycromatografías de intercambio iónico en DEAE Sepharosa, dehidroboficidad en Phenyl Superosa, de exclusión molecular en Superosa 6 y en fase reversa con una columna C4, lográndose unapurificación de 2300 veces. Los análisis en geles desnaturalizantcs de poliacrilamida y decromatografía en Sephacryl S-200 indican que la subunidad proteicao el principal producto de su proteólisis tendría un peso molecularaparente de 60 kDa, mientras que el de la proteína nativa sería deaproximadamente 200 kDa. listos resultados sugirirían que la ODCestaría formada por tres o cuatro subunidades.
Citación:
---------- APA ----------
Sanchez, Cecilia Palmira. (1993). Metabolismo de poliaminas en tripanosomátidos : Ornitina decarboxilasa de Leishmania mexicana. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2603_Sanchez
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Sanchez, Cecilia Palmira. "Metabolismo de poliaminas en tripanosomátidos : Ornitina decarboxilasa de Leishmania mexicana". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 1993.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2603_Sanchez
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