Adrenocorticotropina induce en células adrenales la formación de podosomas vía la inducción de la fosforilación en tirosina de caveolina-1

Colonna, Cecilia

Registro:

Documento:	Tesis Doctoral
Disciplina:	biologia
Título:	Adrenocorticotropina induce en células adrenales la formación de podosomas vía la inducción de la fosforilación en tirosina de caveolina-1
Título alternativo:	ACTH-induced caveolin-1 phosphorylation is related to podosome assembly in y1 adrenal cells
Autor:	Colonna, Cecilia
Editor:	Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Filiación:	Universidad de Buenos Aires - Facultad de Medicina - Departamento de Bioquímica Humana. Laboratorio de Hormonas en la Regulación y Diferenciación Celular
Publicación en la Web:	2023-05-09
Fecha de defensa:	2005
Fecha en portada:	2005
Grado Obtenido:	Doctorado
Título Obtenido:	Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Ciencias Biológicas
Director:	Podestá, Ernesto J.
Consejero:	Ceballos, Nora
Idioma:	Español
Palabras clave:	ESTEROIDOGENESIS; PROTEINA QUINASA A; REDONDEO CELULAR; CAVEOLINA-1; CITOESQUELETO; PODOSOMASPROTEIN KINASE A; ROUNDING-UP; STEROIDOGENESIS; ACTIN CYTOSKELETON; CAVEOLIN-1; PODOSOMES
Formato:	PDF
Handle:	http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3807_Colonna
PDF:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n3807_Colonna.pdf
Registro:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n3807_Colonna
Ubicación:	Dep.BIO 003807
Derechos de Acceso:	Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Colonna, Cecilia. (2005). Adrenocorticotropina induce en células adrenales la formación de podosomas vía la inducción de la fosforilación en tirosina de caveolina-1. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3807_Colonna

Resumen:

Las células de la línea adrenocortical Y1 responden a ACTH, con un incremento en la síntesis y secreción de hormonas esteroides, con un consecuente cambio en la morfología celular (rounding up) que facilita la traducción de la señal mediada por el AMP cíclico, e inducción del transporte del colesterol de la membrana mitocondrial externa a la interna, paso limitante en la esteroidogénesis. La compartimentalización intracelular es fundamental para determinar la especificidad de distintos caminos de señalización mediados por el mismo segundo mensajero; es en este sentido que la existencia de los microdominios de membrana denominado caveola, han demostrado tener un rol fundamental en la comparti-mentalización de moléculas dentro de la célula. A su vez, la caveolina interactúa con diversas proteínas regulando así su actividad. El objetivo de la presente tesis fue estudiar la participación de caveolina-1, proteína estructural de la caveola, en un sistema esteroidogénico, dependiente de la vía de activación de la proteína quinasa A asociado a cambios en el citoesqueleto, y su regulación por ACTH y asociación con estructuras del citoesqueleto. Se demostró que ACTH, vía AMP cíclico, induce la traslocación y fosforilación en tirosina de caveolina-1. En condiciones basales la fosfocaveolina se distribuye en los extremos de los filamentos de actina, siendo su localización semejante a los sitios de adhesión focal. Luego de la estimulación por ACTH/8Br-AMPc, hay un cambio en la estructura asociada a fosfocaveolina, que se redondea formando una estructura en forma de anillo o roseta, que contiene un centro de F-actina circundado por fosfocaveolina-1, y se distribuye en la periferia celular. El número de anillos incrementa luego del tratamiento hormonal y se correlaciona con la inducción en la fosforilación de caveolina-1 por ACTH78Br-AMPc. Estudios de microscopía confocal y electrónica, además de colocalización con proteínas del citoesqueleto, revelan que se trata de una estructura de adhesión celular denominada podosoma. La formación de podosomas inducida por ACTH en las células Y1 depende de la actividad de una proteína tirosina quinasa mediada por inducción de la proteína quinasa A. Se demostró además la participación de las pequeñas proteínas Rho GTPasas en la inducción del redondeo celular mediado por ACTH. Estos resultados reafirman, una vez más, que las respuestas funcionales y morfológicas inducidas por la activación de la PKA en células esteroidogénicas están relacionadas con la dinámica del citoesqueleto y demuestran la participación de una nuevo blanco de ACTH, la caveolina-1.

Abstract:

Y1 adrenocortical cells respond to ACTH with a characteristic rounding-up that facilitates cAMP signaling, critical for transport of cholesterol to the mitochondria and increase in steroid secretion. Compartmentalization of molecules within the cell is a key facet of cellular regulation and specificity. In this sense, caveolae microdomains have been shown to be implicated in the regulation of signal transduction pathways, as caveolin-1, the structural protein of caveolae, associates with key regulatory proteins that localize within caveolae, and controls at the same time their activity. We here demonstrate that caveolin-1 participates in coupling activation of protein kinase A (PKA) to the control of cell shape. ACTH/8-Br-cAMP induced reorganization of caveolin-1-positive structures in correlation with the cellular rounding-up. Concomitant with this change there was an increase in the phosphorylation of caveolin-1 (Tyr-14) localized at focal adhesions (FA) with reorganization of FA to rounded, ring-like structures. Colocalization with Phalloidin showed that phosphocaveolin is present at the edge of actin filaments and that after ACTH stimulation, F-actin dots at the cell periphery become surrounded by phosphocaveolin-1. These observations, along with confocal and electron microscopy studies, as well as colocalization with cytoskeletal markers, revealed these structures as podosomes. Podosome assembly was dependent on both PKA and tyrosine kinase activities since their formation was impaired after treatment with specific inhibitors, such as myristoylated peptide kinase inhibitor (PKI), or Src inhibitor PP2, respectively, previous to ACTH/ 8-Br-cAMP stimulation. We demonstrate also the participation of the small RhoGTPases in coupling ACTH signal to the cellular rounding-up. These results show for the first time that ACTH induces caveolin-1 phosphorrylation and podosome assembly in Y1 cells and support the view that the morphological and functional responses to PKA activation in steroidogenic cells are related to cytoskeleton dynamics.

Citación:

---------- APA ----------

Colonna, Cecilia. (2005). Adrenocorticotropina induce en células adrenales la formación de podosomas vía la inducción de la fosforilación en tirosina de caveolina-1. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3807_Colonna

---------- CHICAGO ----------

Colonna, Cecilia. "Adrenocorticotropina induce en células adrenales la formación de podosomas vía la inducción de la fosforilación en tirosina de caveolina-1". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2005.http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3807_Colonna

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