Registro:
| Documento: | Tesis de Maestría |
| Disciplina: | biologia |
| Título: | Regulación de la actividad de la PKA por fosforilación de Tpk1p durante la reconfiguración del metabolismo respiratorio al fermentativo e S.cerevisiae |
| Título alternativo: | Regulation of PKA activity by phosphorylation of Tpk1 during reconfiguration of respiratory to fermentative metabolism in S.cerevisiae |
| Autor: | Pugliessi, Marcelo |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Publicación en la Web: | 2023-05-09 |
| Fecha de defensa: | 2006 |
| Grado Obtenido: | Maestría |
| Título Obtenido: | Magíster de la Universidad de Buenos Aires en el área de Biología Molecular Médica |
| Director: | Moreno de Colonna, Silvia M. |
| Idioma: | Español |
| Palabras clave: | LEVADURA; AUTOCATALITICOFOSFORILACION |
| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4202_Pugliessi |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n4202_Pugliessi.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n4202_Pugliessi |
| Ubicación: | Dep.BMM 004202 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Pugliessi, Marcelo. (2006). Regulación de la actividad de la PKA por fosforilación de Tpk1p durante la reconfiguración del metabolismo respiratorio al fermentativo e S.cerevisiae. (Tesis de Maestría. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4202_Pugliessi |
Resumen:
En S. cerevisiae, la Proteína Quinasa dependiente de cAMP (PKA) controla una muy amplia variedad de procesos. Su activación juega un papel central en el control de la glucólisis y gluconeogénesis, movilización de carbohidratos como trehalosa y glucógeno, represión de genes de resistencia al estrés y control de la proliferación celular. La PKA en mamíferos ha demostrado ser una fosfoproteína con múltiples sitios de fosforilación, que tienen influencia sobre el ensamblado de una enzima activa y/o sus propiedades cinéticas. En S. cerevisiae, la isoforma Tpk1 presenta un cambio en su estado de fosforilación dependiente del estado metabólico de la célula. Las células creciendo en fuentes de carbono no fermentables o en fase estacionaria presentan isoformas de Tpk1 con bajo grado de fosforilación. Cuando estas células reciben un estímulo de glucosa, Tpk1 aumenta su grado de fosforilación, incrementando así su afinidad por el sustrato. La fosforilación reversible de Tpk1, dependiente de la presencia de glucosa, agrega un nuevo nivel de control de la actividad quinasa, además de los clásicos como: regulación por subunidad R, dominios de cAMP y localización. El mecanismo molecular de fosforilación de Tpk1 inducido por glucosa no ha sido caracterizado, como así tampoco si ocurren cambios similares en las otras isoformas Tpk2 y Tpk3. Tampoco se han realizado análisis de los posibles residuos a ser fosforilados en estas proteínas. Con el objetivo de responder a estos interrogantes, hemos realizado experimentos que sugieren que Tpk1 sufre fosforilaciones por un mecanismo autocatalítico e intramolecular. Además, Tpk3 podría estar regulada por modificaciones similares, no sucediendo lo mismo con la isoforma Tpk2. Por último, para un primer abordaje de caracterización de los sitios de fosforilación, realizamos un análisis in silico de Tpk1. De este análisis surgieron péptidos derivados de la secuencia de dicha proteína que fueron utilizados como sustrato en ensayos quinasa que señalan que el residuo Serˆ179 es un candidato a sufrir fosforilación.
Abstract:
In Saccharomyces cerevisiae cAMP-dependent Portein Kinase (PKA) controls a very wide variety of processes. Its activation plays a central role in the control of glycolysis and gluconeogenesys, mobilization of carbohydrates such as trehalose and glycogen, stress-resistant gene repression and cellular proliferation control. In mammals, PKA has proved to be a phosphoprotein with multiple phosphorylation sites, which influence the assembly of an active enzyme and/or its kinetic properties. In S. cerevisiae, Tpk1 isoform shows a change in its phosphorylation state according to the metabolic status of the cell. The cells growing on non-fermentable carbon sources or stationary phase present less phosphorylated Tpk1 isoforms. When these cells are stimulated with glucose, Tpk1 increases its phosphorylation degree and its affinity toward substrates. Reversible phosphorylation of Tpk1, which is highly dependent on glucose, adds a new level of control of kinase activity, apart from those classics such as R subunit regulation, cAMP domains and localization. The glucose-induced molecular mechanism of phosphorylation of Tpk1 has not been characterized, nor if similar changes occur in the other isoforms, Tpk2 and Tpk3. Candidate residues for phosphorylation have never been analyzed in these proteins. With the aim of answering these questions, we have conducted some experiments that suggest that Tpk1 undergoes phosphorylation by an autocatalytic and intramolecular mechanism. Furthermore, Tpk3 could be regulated by similar modifications while Tpk2 could not. Finally, as a first approach to the characterization of phosphorylation residues, we made an in silico analysis of Tpk1. This analysis gave rise to peptides derived from the Tpk1 sequence that were used as substrates in kinase assays and that indicate that Ser179 is a candidate to be phosphorylated.
Citación:
---------- APA ----------
Pugliessi, Marcelo. (2006). Regulación de la actividad de la PKA por fosforilación de Tpk1p durante la reconfiguración del metabolismo respiratorio al fermentativo e S.cerevisiae. (Tesis de Maestría. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4202_Pugliessi
---------- CHICAGO ----------
Pugliessi, Marcelo. "Regulación de la actividad de la PKA por fosforilación de Tpk1p durante la reconfiguración del metabolismo respiratorio al fermentativo e S.cerevisiae". Tesis de Maestría, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2006.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4202_Pugliessi
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